Плазма и сыворотка крови. Определение, способы их получения, применение.

Сы́воротка кро́ви — плазма крови, лишённая фибриногена. Сыворотки получают либо путём естественного свёртывания плазмы (нативные сыворотки), либо осаждением фибриногена ионами кальция. В сыворотках сохранена большая часть антител, а за счёт отсутствия фибриногена резко увеличивается стабильность.

Сыворотку выделяют при анализе крови на инфекционные заболевания, при оценке эффективности вакцинации (титр антител), а также при биохимическом анализе крови.

При получении сыворотки антикоагулянт не используют. Венозную кровь берут утром натощак путем пунктации локтевой вены сухой острой короткой иглой с широким просветом (без шприца) непосредственно в пробирку по стенке. Предпочтительнее применять одноразовые пластмассовые пробирки, так как может происходить обмен ионами между кровью и стеклом, не исключены следы моющих средств. Требуется учитывать положение тела (сидя или лежа) и при повторных исследованиях, по возможности, производить взятие крови так же.

При взятии крови из артериального или венозного катетера необходимо предварительно удалить остатки лекарственного раствора из системы. Это производится путем отсасывания шприцом небольшого количества крови, и только после этого отбирают кровь вторым шприцом.

Выбор материала (цельная кровь, плазма, сыворотка или клетки крови) зависит от целей исследования и определяемого показателя:

1. Может определяться разницей в содержании определяемого вещества в капиллярной и венозной крови

2. Возможны различия в содержании метаболитов в клетках крови и жидкой ее части:

· например, мочевина и глюкоза равномерно распределены между плазмой и эритроцитами, поэтому эти показатели можно определять как в цельной крови, так и в сыворотке (плазме).

· для большинства исследований нужно использовать сыворотку или плазму (для определения неравномерно распределенных микроэлементов и билирубина), при этом нужно учитывать, что в процессе свертывания крови и стоянии сыворотки над сгустком происходит разрушение форменных элементов. Это искажает результаты исследования как за счет увеличения жидкой части пробы, так и из-за выхода некоторых веществ.

· необходимо также учитывать, что плазма крови более богата белками, а в сыворотке крови отсутствуют белки свертывающей системы, участвующие в образовании фибринового сгустка.

· в некоторых случаях рекомендуется использовать плазму крови. К примеру, ионы калия и ряд ферментов (кислая фосфатаза, аргиназа, ферменты гликолиза, аминотрансферазы) в значительном количестве содержатся в тромбоцитах и эритроцитах и освобождаются из них в процессе свертывания.

Плазму крови получают с использованием различных антикоагулянтов В пробирку с антикоагулянтом набирают кровь, немедленно перемешивают (без пузырьков), выдерживают при комнатной температуре или лучше в ледяной бане в течение 20-30 мин и затем центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин. При определении активности ферментов центрифугирование проводят при 4-6°С в рефрижераторных центрифугах. Сразу отделяют плазму от осевших клеток в сухой чистый флакон.

3. При необходимости исследовать показатели метаболизма клеток крови также используют антикоагулянты при получении крови во избежание разрушения клеток и получения ложных результатов.

Желательно проводить исследования в свежем материале, но если необходимо хранение, то хранить при –20°С (размораживать можно только однократно, поэтому лучше предварительно разлить плазму на порции).

Для получения сыворотки кровь оставляют при комнатной температуре на 15 мин, затем тонкой стеклянной палочкой (или лучинкой, пастеровской пипеткой) аккуратно, не разрушая клетки, отделяют сгусток от стенок пробирки и центрифугируют 10-15 мин при 3000 об/мин. Сразу после центрифугирования отделяют сыворотку от сгустка.

Гемолизированную сыворотку и плазму для анализа не рекомендуется использовать, т.к.:

· в нее поступают метаболиты из разрушенных клеток, которые могут вступить в реакцию с определяемым веществом или компонентами рабочего реактива;

· гемоглобин искажает результаты фотометрии (в этом случае необходимо делать контроль на окраску плазмы);

· гемоглобин может взаимодействовать с исследуемыми веществами и влиять на активность ферментов.