ФАГОЦИТОЗ. контактный киллинг

Изучение активности клеточных механизмов врожденного иммунитета

 

Вопросы для подготовки

1. Врожденный иммунитет, определение, эффекторы, механизмы и функции.

2. Патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (PAMP) и патоген-распознающие рецепторы (PRR), определение понятия, примеры. Классификация PRR.

3. Toll-like рецепторы, история открытия и классификация. Трансдукция сигнала.

4. Хемотаксис. Роль молекул адгезии и хемокинов в миграции лейкоцитов из кровяного русла в очаг воспаления. Воспаление как защитная реакция организма, стадии.

5. Фагоцитоз, определение понятия, роль фагоцитоза в иммунной защите.

6. Общая характеристика фагоцитирующих клеток их функциональные отличия. Распознавание клетками объектов фагоцитоза. Опсонизация и рецепторы фагоцитов.

7. Общая характеристика стадий фагоцитоза. Механизмы завершенного и незавершенного фагоцитоза.

8. Участие цитоскелета в поглощении фагоцитируемых объектов.

9. Бактерицидные системы фагоцитов.

10. NK-клетки, рецепторы и функции.

11. Механизм контактного киллинга.

12. Заполнить таблицу «Роль показателей естественной резистентности в антимикробной защите организма человека»:

 

Фактор	Роль в антимикробной защите	Факторы естественной резистентности (для внесения в незаполненный столбец таблицы)
	Секреция цитокинов, регулирующих клеточные и гуморальные механизмы защиты	Нейтрофилы Естественные киллеры (NK-клетки) Белки системы комплемента Белки острой фазы воспаления (БОФ) Лизоцим Дефенсины Макрофаги Дендритные клетки Тромбоцитарный катионный белок (ТКБ)
	Фагоцитоз внеклеточных патогенов
	Лизис клеточной стенки преимущественно грам+ бактерий
	Опсонины (факторы, усиливающие фагоцитоз)
	Уничтожение клеток, инфицированных микроорганизмами, опухолевых клеток
	Лизис преимущественно грам- бактерий и усиление цитолиза инфицированных, опухолевых клеток
	Универсальные антимикробным факторы (широкий спектр антимикробного действия)

 

9. Заполнить таблицу «Неспецифическое распознавание патогенов»:

PAMP*	PRR*	PAMP	PRR
Пептидогликан		Порины, белки клеточной стенки, белки ресничек
Тейхоевые и липотейхоевые кислоты
Несиалированные полисахариды		Белки вирусных капсидов
Липополисахариды		Гликопротеины суперкапсидов
Липоарабиноманнаны, миколовые кислоты		Неметилированные СрG-ДНК
Флаггеллин		Двунитевые РНК

* PAMP – патоген-ассоциированные молекулярные паттерны и PRR – патоген-распознающие рецепторы

 

Практическая работа

 

З а д а н и е №1

Определить фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови (фагоцитарный показатель – ФП и фагоцитарное число – ФЧ). Оформить протокол в виде рисунка. Сделать заключение.

 

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

В центрифужную пробирку с 0,25 мл 2 %-ного цитрата натрия вносят 0,5 мл исследуемой цельной капиллярной или венозной крови, взятой натощак, добавляют 0,25 мл 2 млрд взвеси суточной микробной культуры (S. aureus 209Р или Е. coli Гусев), предварительно подогретой до 37 ºС. Лейкоцитарно-микробную смесь инкубируют при 37°С в течение 40 мин при постоянном перемешивании. Из полученной взвеси готовят 2 тонких мазка, высушивают при комнатной температуре, фиксируют в смеси Никифорова 5-10 мин и окрашивают по Романовскому-Гимзе.

Готовые окрашенные мазки микроскопируют с иммерсией. В разных полях зрения находят не менее 25 лейкоцитов и считают количество микробов, поглощенное каждым лейкоцитом. Для характеристики фагоцитарной активности крови подсчитывают ФП и ФЧ.

ФП – это процент активно фагоцитирующих лейкоцитов в расчете на 100 лейкоцитов.

ФЧ – среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом (для этого общее число поглощенных микробов делят на количество подсчитанных клеток – 25).

Для лейкоцитов крови здоровых людей ФП колеблется от 40 до 80%, ФЧ – от 4 до 10.

 

З а д а н и е №2

Изучить незавершенный фагоцитоз гонококка. Микроскопировать с иммерсией и объективом ´90 фиксированный препарат, приготовленный из гнойного отделяемого больного гонореей, окраска по Граму. Оформить протокол в виде рисунка с обозначениями. Ответить на вопросы:

1. Какой метод исследования применен?

2. В чем причина незавершенного фагоцитоза гонококков?

 

Занятие №3

Система комплемента. Антимикробные пептиды и белки