Определение микробиологических показателей исследуемой пробы почвы

Определение общих колиформных бактерий (ОКБ) в исследуемой пробе почвы

Приготовили ряд десятикратных разведений. Для этого налили в 3 стерильные пробирки по 4,5 мл 0,9% физиологического раствора хлорида натрия. Из первого разведения, находящегося во флаконе (концентрация 10^-1) отобрали стерильной градуированной пипеткой 0,5 мл и перенесли в первую пробирку (концентрация 10^-2), затем из нее перенесли 0,5 мл во вторую (концентрация 10^-3). Для приготовления каждого разведения использовали стерильные пипетки.

Рисунок 33 – Схема приготовления разведений для определения ОКБ

Посеяли в чашки Петри на среду Эндо из разведений 10^-2, 10^-3, 10^-4 по 0,1 мл суспензий. Чашки подписали, поставили в термостат при температуре 37°С на 24 часа. Учитывали отдельно выросшие колонии красного и малинового цвета. Колонии описали, сделали мазки и окрасили их по Граму.

Определение термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) в исследуемой пробе почвы

Произвели пересев колоний, выросших на среде Эндо при температуре 37°С методом штриха также на среду Эндо. Чашку подписали, поставили в термостат при температуре 44°С на 24 часа. Учитывали колонии красного и малинового цвета.

Определение общего микробного числа (ОМЧ) в исследуемой пробе почвы

Приготовили по тому же принципу еще 3 разведения: 10^-2, 10^-3, 10^-4. Для приготовления каждого разведения использовали стерильные пипетки.

Рисунок 34 – Схема приготовления разведений для определения ОМЧ

В одну чашку Петри внесли 1 мл из разведения с концентрацией 10^-3, во вторую 1 мл из разведения с концентрацией 10^-5 и в третью чашку из разведения с концентрацией 10^-7. Таким образом, произвели две повторности. Затем во все чашки залили расплавленный МПА, перемешали, дали застыть. Чашки подписали и поставили в термостат часть чашек при температуре 60°С на 24 часа, другую часть при температуре 37°С на 24 часа. После инкубации колонии описали, сделали мазки и окрасили их по Граму.

Для получения сравнимых и более полных результатов произвели пересчет количества обнаруженных микроорганизмов на 1 г абсолютно сухой почвы. Для этого навеску почвы массой 10 г поместили в заранее взвешенную чашку Петри и высушивали в сухожаровом шкафу при температуре 105°С. Первое контрольное взвешивание высушенной почвы произвели через 1 час, затем высушили почву еще раз до постоянного веса.

Результаты

Определение микробиологических показателей исследуемой пробы почвы

Определение общих колиформных бактерий (ОКБ) в исследуемой пробе почвы

 

Таблица 10 – Число колоний на среде Эндо при температуре 37°С

№ чашки	Концентрация	Количество колоний
	10-2
	10-3
	10-4

 

Для расчета концентрации ОКБ используется формула 1.

X (ОКБ) = = 1801,8 КОЕ/мл

Для пересчета концентрации ОКБ на 1 г сырой почвы:

, (3)

где Nc – количество клеток бактерий в 1 г абсолютно сухой почвы, [КОЕ/г];

Nc (ОКБ) = = 18018 КОЕ/г

Для пересчета концентрации ОКБ на 1 г сухой почвы:

, (4)

где:

N – количество клеток бактерий в 1 г абсолютно сухой почвы, [КОЕ/г];

Nc – количество клеток бактерий в г сырой почвы, [КОЕ/г];

C – влажность исследуемой почвы, [%].

Навеска влажной почвы имела массу 10 г, после высушивания масса составила 8,2 г, следовательно, влажность исследуемой почвы 18%.

Коли индекс – количество КОЕ/л или КОЕ/г кишечной палочки

Коли индекс = [КОЕ/г] (5)

Коли индекс = = 3,9 КОЕ/г

Коли титр – наименьший объем, в котором содержится единица кишечной палочки.

Коли титр = [КОЕ/г] (6)

Коли титр = = 0,26 КОЕ/г

Рисунок 35 – Концентрация 10^-2 Рисунок 36 – Концентрация 10^-3

Рисунок 37 – Концентрация 10^-4

При температуре 37°С на чашках со средой Эндо выросли колонии двух типов:

1 тип: средние колонии; форма колоний – круглая; профиль колоний – выпуклый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – жидкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – непрозрачные; цвет колоний – розовый. Окраска по Граму выявила мелкие грамотрицательные палочки.

2 тип: крупные колонии; форма колоний – неправильная; профиль колоний – выпуклый; край колоний – волнистый; структура колоний – неоднородная; консистенция колоний – густая, вязкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – непрозрачные; цвет колоний – розовый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные кокки.

Рисунок 39 – препарат 2 типа колоний

Рисунок 38 – препарат 1 типа

колоний

Определение термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) в исследуемой пробе почвы

При температуре 44°С на среде Эндо колоний не выросло. Это говорит о том, что в образце почвы нет термотолерантных колибактерий. Показатель ТКБ = 0.