Правила приготовления питательных сред

Питательные среды должны отвечать следующим требованиям:

содержать в достаточном количестве все необходимые питательные вещества, соли и ростовые факторы;

иметь оптимальную рН, вязкость, достаточную влажность;

должны быть стерильными и по возможности прозрачными.

По назначению питательные среды подразделяют на следующие основные категории:

основные – предназначенные для выращивания многих видов бактерий (мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар);

элективные – способствующие развитию отдельных видов микробов (кровяные, сывороточные, яичные);

селективные – подавляющие рост одних микроорганизмов и не влияющие на рост других (среды Мюллера, селенитовая, Рапопорт);

дифференциально-диагностические – позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным проявлениям (среды Эндо, Левина, Плоскирева, Гиса).

По консистенции питательные среды могут быть жидкими, плотными и полужидкими. Жидкие среды готовят на основе водных растворов каких-либо веществ, чаще всего мясной воды, различных гидролизатов, иногда естественных продуктов (молока, крови). Для получения плотных сред к ним добавляют агар-агар, который представляет собой полисахарид сложного состава, получаемый из морских водорослей. Агар-агар плавится при 100 ⁰С, но при охлаждении сохраняет жидкую консистенцию до 45 ⁰С. Для получения плотных сред его добавляют в концентрации 1,5–3,0 %. Полужидкие среды имеют вязкую консистенцию благодаря добавлению к ним небольшого количества агара

2.Техники выделения чистых культур:

Техника посева на чашки Петри бактериологической петлей

Петлю исследуемого материала наносят на агар около края чашки и растирают на небольшом участке, затем, не отрывая петли, засевают материал на всю поверхность среды параллельными штрихами с интервалом 4–5 мм (рис. 1а). Посев можно производить и следующим способом: делается 4–5 параллельных штрихов в направлении А, затем петля прожигается в пламени горелки и ею проводятся штрихи в направлении Б поперек первоначально нанесенных полос. Петля снова прожигается, делаются штрихи в направлении В, а затем и в направлении Г (рис. 1б). Ещё один вариант посева петлей заключается в том, что чашку со средой делят на 4–5 радиальных секторов, и одной и той же петлей поочередно делают посевы на всех секторах (рис. 1в).

 

Техника посева шпателем (метод Дригальского)

Берут 3 чашки Петри с плотной питательной средой. На середину первой петлей или пастеровской пипеткой вносят каплю исследуемого материала и круговыми движениями шпателя производят сплошной посев. Этим же шпателем, не стерилизуя его, распределяют материал по второй и третьей чашкам

Описание выросших колоний

После инкубации изучают изолированные колонии. Колонии обладают набором определенных признаков:

а) размеры – большие (диаметр более 4–5 мм), средние (диаметр 2–4 мм), мелкие (диаметр менее 1–2 мм) и микроскопические (диаметр менее 1 мм);

б) цвет – белый, жёлтый, сине-зелёный, бурый, чёрный, цвет среды и др.;

в) форма – круглая, лаптеобразная, розеткообразная и др.;

г) края – ровные, волнистые, зазубренные, отростчатые и др.;

д) поверхность – гладкая, шероховатая, блестящая, матовая, плоская, выпуклая, куполообразная, вдавленная и др.;

е) консистенция – сухая, пастообразная, слизистая, однородная, зернистая;

ж) прозрачность – прозрачная, мутная.

Для определения морфологии клетки и их тинкториальных свойств из части исследуемой колонии готовят мазок, окрашивают по Граму. Оставшуюся часть колонии отсевают на скошенный питательный агар.

Техники пересева

Техника посева проб в пробирки со скошенной средой

Обычно на скошенные среды переносят культуру с колоний на чашках. Для этого необходимо приподнять крышку чашки Петри и стерильной петлёй прикоснуться к колонии. После этого в левую руку берут пробирку со скошенным агаром (между большим и указательными пальцами) так, чтобы поверхность скошенного агара была перед глазами. Пробирку открывают над пламенем горелки, обжигают её край, а затем петлю вводят в пробирку до дна, где имеется небольшое количество конденсационной воды. Плоской поверхностью петли прикасаются к поверхности агара и делают посев штрихообразными движениями, постепенно продвигаясь снизу вверх. Обжигают в пламени край пробирки и пробку, закрывают пробирку над пламенем.

Техника посева в жидкую среду

Простерилизованной бактериологической петлей отбирают материал, наносят его на стенку пробирки у верхнего уровня среды и, слегка встряхивая пробирку, смывают его средой. Край пробирки и пробку обжигают, быстро закрывают.

Техника посева уколом в столбик плотной или полужидкой среды

Используют высокий столбик плотной или полужидкой питательной среды, полускошенные плотные среды. Во всех случаях бактериальной петлей или иглой с посевным материалом делают прокол среды с поверхности до дна. Пробирку рекомендуют держать дном вверх, чтобы не наступила контаминация среды воздушной микрофлорой.