Условия культивирования микроорганизмов

1.Температура +37°С – выращивание микроорганизмов проводится в термостате.

2. Влажность.

3. Аэрация – доступ воздуха.

4. Питательные среды.

 

Задание 6. Изучите алгоритм приготовления питательной среды Эндо.

 

ü Ответственные за приготовление среды, варят среду.

 

1. Навеску препарата в количестве 4 г на 100 мл, тщательно размешивают в 100 мл дистиллированной воды, нагревают до кипения, периодически перемешивая, не давая вспениваться, и кипятят 3 мин до полного расплавления агара.

2. Горячую среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр и снова доводят до кипения.

3. Среду охлаждают до температуры 45-50°С, и разливают в стерильные чашки Петри.

 

Характеристика среды Эндо.

Среда Эндо — дифференциально-диагностическая питательная среда, предназначенная для выделения Escherichia coli. Названа по имени предложившего её японского бактериолога Сигэру Эндо (1869—1937). Обладает слабыми селективными свойствами, компоненты среды подавляют рост грамположительных бактерий.

Готовая к употреблению среда Эндо имеет бледно-розовый цвет либо бесцветна

Состав.

- Пептон ферментативный – 10,0

- Гидролизат казеина неглубокой степени расщепления ферментативный сухой - 10,0

- Дрожжевой экстракт – 1,0

- Натрия хлорид – 3,4

- Натрия сульфит – 0,8

- Натрия гидроортофосфат – 0,75

- лактоза – 10,0

- фуксин основной – 0,2

- агар микробиологический – 10,5 ± 2,5

pH 7,3 ± 0,2

 

Задание 7. Изучите материал «Питательные среды». Обсудите в паре: требования, классификацию, этапы приготовления питательных сред.

 

Питательные среды

 

Требования к питательным средам

1. Питательность – наличие всех питательных веществ;

2. Реакция рН – 7,2 (слабощелочная);

3. Оптимальная влажность.

4. Определенная вязкость.

5. Изотоничность – соответствие 0,5% раствору натрия хлорида.

6. Стерильность, чтобы другие микробы не препятствовали росту изучаемой микрофлоры.

7. Прозрачность.

 

Классификация питательных сред

1. По степени сложности:

- Простые;

- Сложные.

2. По происхождению:

- Натуральные (МПБ – мясо-пептонный бульон, пептонная вода и др.);

- Синтетические.

3. По консистенции:

- Жидкие;

- Полужидкие;

- Плотные. Для их получения в среду добавляют агар-агар, полученный из морских водорослей, при застывании которого среда становится плотной.

4. По целевому назначению:

- Основные: (мясо-пептонный бульон, питательный агар и др.) применяются для выращивания большинства микроорганизмов.

- Элективные: для выращивания определенного вида микроба.

- Дифференциально-диагностические: для отличия одних микроорганизмов от других (среды Гисса с добавлением углеводов).

- Консервирующие: предназначены для первичного посева при длительной транспортировке исследуемого материала.

 

ТВЕРДЫЕ

УНИВЕРСАЛЬНЫЕ

ПИТАТЕЛЬНЫЙ АГАР или МПА (мясо-пептонный агар) используют для выращивания бактерий, содержит гидролизат кильки, экстракт дрожжей, агар, хлорид натрия и дистиллированную воду. Растворяют ингредиенты, кипятят, фильтруют, стерилизуют (120 гр. С 20 минут). Затем разливают в стерильные пробирки или чашки Петри. На чашке с агаром видны разнообразные колонии микробов, выросшие в при посеве воздуха.

Смесь бактерий. На чашке с МПА видны различные колонии бактерий, отличающиеся по цвету, форме, размерам, прозрачности…. Культуральные свойства Escherichia coli: круглые с ровными краями, гладкие, влажные, слизистые, полупрозрачные колонии.

 

дифференциально-диагностическая и селективная

ЖЕЛТОЧНО-СОЛЕВОЙ АГАР ЧИСТОВИЧА - для культивирования стафилококков. Содержит питательный агар, желток куриного яйца, повышенные концентрации хлорида натрия (8-10%), которые не препятствуют размножению стафилококков и обеспечивают элективность среды для данных микробов. Среда позволяет дифференцировать лецитиназопозитивные стафилококки, вокруг колоний которых образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком.

 

 

КРОВЯНОЙ АГАР питательная среда для выявления гемолитических свойств бактерий. К расплавленному остуженному (до 45-50 гр С) питательному агару асептически добавляют 5-10% дефибринированной крови, хорошо перемешивают и сразу же разливают в чашки Петри. Вокруг выросших колоний отчетливо видны прозрачные зоны гемолиза.

 

 

ТВЕРДЫЕ

дифференциально-диагностическая и селективная

СРЕДА ПЛОСКИРЕВА способствует лучшему росту некоторых бактерий (возбудители брюшного тифа, паратифов, дизентерий) и подавляет рост других (кишечная палочка и пр.). Содержит питательный агар с лактозой, бриллиантовым зеленым, солями желчных кислот, минеральными солями и индикатором (нейтральный красный). Лактозонегативные колонии вырастают бесцветными, лактозопозитивные – красными. На некоторых модификациях среды Плоскирева выявляется еще и способность сальмонелл выделять сероводород: выросшие колонии чернеют.

 

ЖИДКИЕ

Селективная среда с маннитом и желчью

Для выявления анаэробов