Практическое занятие №32, 33

Практическое занятие №32, 33

1. Устройство прибора ФЭК-56 М.

2. Техника работы с прибором.

Устройство прибора ФЭК-56 М.

В корпусе прибора имеются осветительная и оптическая системы, кюветодержатели, фотоэлементы, электрическая сеть с микроамперметром.

Осветительная система включает осветитель, который крепится к задней стенке корпуса прибора. В осветителе установлены лампа накаливания и лампа ультрафиолетового излучения. К осветительной части прибора относятся также призма, разделяющая световой поток на два луча, конденсоры и зеркала, отражающие свет двумя параллельными пучками.

Световые пучки перекрываются шторкой, преграждающей путь света в направлении фотоэлемента. Открывается и закрывается шторка рукояткой.

К оптической системе прибора относятся светофильтры, линзы, раздвижные диафрагмы. Девять стеклянных светофильтров попарно вмонтированы в диск, укрепленный на задней стенке корпуса прибора. Светофильтры обозначены номерами в соответствии с длинами волн, максимально пропускаемых данным фильтром.

Для включения светофильтра в световой пучок поворачивают диск рукояткой. Цифры на шкале показывают, какие светофильтры включены. Рабочее положение светофильтра фиксируется.

Раздвижные диафрагмы состоят из нескольких металлических пластин, образующих прямоугольник, боковые грани которого могут передвигаться навстречу друг другу, уменьшая ширину щели от максимального открытия до нуля. Этим регулируется световой поток, падающий на фотоэлементы. Боковые грани диафрагм приводятся в движение поворотом отсчетных барабанов. На каждом барабане нанесено две шкалы. Черная шкала - шкала светопропускания - показывает интенсивность светового потока, проходящего через диафрагму. Эта интенсивность пропорциональна ширине щели. Красная шкала показывает оптическую плотность вещества, или степень поглощения им света, между величиной которой и концентрацией вещества в окрашенном растворе существует прямо пропорциональная зависимость.

Шкала светопропускания нанесена так, что 100% светопропускания соответствует максимальному раскрытию раздвижной диафрагмы, а нуль -полному ее закрытию. Нулевая точка красной шкалы находится на уровне отметки 100% черной шкалы. Красная шкала неравномерна.

В приборе имеются два кюветодерлсателя, вставленные в каретки. В правом кюветодержателе устанавливаются две кюветы. Перемещение кювет в правом световом пучке проводится поворотом рукоятки. Левый кюветодержатель имеет гнездо только для одной кюветы.

К прибору прилагаются 4 набора кювет. Каждый из них содержит 7 пар кювет с различными расстояниями между рабочими гранями, позволяющими исследовать жидкости в слоях различной толщины.

Заключенные в корпусе прибора два фотоэлемента связаны с микроамперметром, укрепленным па передней его стенке. Установка микроамперметра производится рукояткой чувствительности. Более тонкая регулировка чувствительности прибора производится рукояткой чувствительности.

Прибор включают в сеть через стабилизатор, обеспечивающий постоянство напряжения тока, питающего источник света. В корпусе стабилизатора смонтированы выпрямитель тока и понижающий трансформатор. Тумблер для переключения ламп (лампа накаливания или лампа ультрафиолетового излучения) выведен из корпуса справа. На передней стенке корпуса находится выключатель сетевого напряжения.

Техника работы с прибором Подготовка прибора к работе

1. Включите прибор за 25-30 мин до начала работы, чтобы он прогрелся, так как сразу после включения показания прибора недостаточно точны и постоянны. Включение производится рукояткой, находящейся на стабилизаторе.

2. Шторка должна быть закрыта.

3. Оба отсчетных барабана установить на нуль по красной шкале (100% по шкале светопропускания - диафрагма полностью раскрыта).

4. Установите «электрический нуль» прибора: рукояткой поставьте стрелку микроамперметра на нуль (при закрытых шторках).

5. Поставьте нужный для данного определения светофильтр.

6. Возьмите три кюветы одинаковой рабочей длины. Выбор кювет зависит от интенсивности окраски раствора. Более темные растворы исследуют в слое толщиной 1,3,5 мм, более светлые - в слое 10, 20, 30, 50 мм. Для получения сравнимых результатов при выполнении определенной методики необходимо всегда пользоваться кюветами одной и той же рабочей длины.

7. Две кюветы заполните контрольным раствором, которым служит обычно растворитель исследуемого вещества, и одну - исследуемым раствором или взвесью.

8. Влевыйкюветодержатель поставьте кювету с контрольным раствором. В одно гнездо правого кюветодержателя поставьте кювету с исследуемым раствором, в другое - кювету с контрольным раствором.

9. В момент начала исследования справа на пути света должна находиться кювета с исследуемым веществом.

Вариант 1.

1. В пробирку поместите 0,5 мл раствора глюкозы, 0,5 мл раствора СuSО₄ и 1 мл 10% раствора NаОН. Нагрейте. Охладите раствор под струёй холодной воды. Пробирку поместите в центрифугу. Получите надосадочную жидкость и определите оптическую плотность этой жидкости на спектрофотометре. Контрольная проба – дистиллированная вода, взятатя в объеме опытной пробы. Сделайте соответствующие рисунки. Вывод.

 

2. Начертите калибровочную кривую по следующим данным: приготовлены растворы белка: 35, 55, 75, 95, г/л. Растворы профотометрированы и получены показатели экстинций соответственно: 0,05; 0,07; 0,085; 0,1. Определите количество белка по построенному графику при показателе экстиции 0,075.

 

Вариант 2.

1. В центрифужную пробирку поместите 0,2 мл лошадиной сыворотки, добавьте 1 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Пробирку поместите в центрифугу. Получите надосадочную жидкость и определите оптическую плотность этой жидкости на спектрофотометре.Контрольная проба – дистиллированная вода, взятатя в объеме опытной пробы. Сделайте соответствующие рисунки. Вывод.

 

2.Начертите калибровочную кривую по следующим данным: приготовлены растворы пирувата натрия: 0,05; 0,10; 0,15; 0,2; 0,25 мкмоль. Растворы профотометрированы и получены показатели экстинций соответственно: 0,09; 0,21; 0,29; 0,35; 0,4. Определите количество пирувата натрия по построенному графику при показателе экстиции 0,25

 

 

Практическое занятие №32, 33

1. Устройство прибора ФЭК-56 М.

2. Техника работы с прибором.