Цитологические исследования мочевого осадка

Методы цитологического исследования мочевого осадка применяются для установления диагноза при латентно текущих формах нефрита. Для цитологического исследования берут свежую утреннюю мочу слабо кислой реакции.

Шаг первый: для концентрирования осадка, 10 мл мочи разливают в 5 центрифужных пробирок и центрифугируют при 1000 оборотов в минуту в течение 2-3 минут. Затем осторожно сняв надосадочную жидкость осадок из всех пробирок сливают в одну и вновь 2-3 минуты центрифугируют при 1000 в минуту.

Шаг второй: полученный осадок суспензируют в несколько капляк надосадочной жидкостью с добавлением 2-3 капель сыворотки.

Шаг третий: полученную суспензию наносят на предметныен стекла, готовят мазки, фиксируют их на протяжении 5 минут в метиловом спирте, высушивают и красят по Рамоновскому-Гимзе.

Шаг четвертый: готовые мазки микроскопируют под иммерсией. Для выведения лейкоцитарной формулы подсчитываю 100-300 лейкоцитов. Если в основе болезни лежит микрбно-воспалительный процесс в лейкоцитарной формуле преобладают нейтрофилы (до 75%), при гломерулонефрите обнаруживаются большое количество мононуклеаров, а при наследственном нефрите – лимфоцитов.

Определение клеток Мальбина- Шернгеймера

Это один из методов диагностики с помощью которого можно дефиринцировать латентно протекающие микробно-воспалительные процессы в почках и мочевых путях, и диффузные заболевания почек.

Шаг первый: Для исследования в центрифужную пробирку помещают 5-10 мл свежей утренней мочи и центрифугируют в течении 2-3 минут при 1000 оборотах в минуту.

Шаг второй: К полученному осадку добавляют 1-2 капли красящего раствора Мальбина-Штернгеймера, размешивают и 1 каплю суспензии наносят на предметное стекло, каплю покрывают покровным стеклом и микроскопируют при масляной иммерсии. Красящий раствор Мальбина-Штернгеймера готовится заранее, хранится 3 месяца. Состоит из растворов № 1 и № 2.

В раствор № 1 входит генциан-фиолетовый-3г., этиловый спирт – 95% - 20 мл, щавелеваокислый аммоний – 0,8 г., трижды дисцилированная вода – 80 мл.

Раствор № 2 содержит: сафранин – 0,25 г.; этиловый спирт – 10 мл.; триждыдисцилированную воду – 100мл.

Оба раствора смешивают в пропорции: раствора № 1 - 1 часть и раствора № 2 - 97 частей. Клетки Мальбина-Штернгеймера представляют собой видоизмененные гранулациты, разбухшие при низком астматическом давлении мочи, имеют овальную, круглую или грушевидную форму. Протоплазма их почти бесцветная, содержит серые гранулы, совершающие Броуновское движение. Ядра применяют бледно-синий либо бледно-фиолетовый цвет. Они встречаются на далеко зашедших стадиях пиелонефрита.

Определение активных лейкоцитов (по В. С. Рябинскому и В. Е. Родоману). «Живые» нейтрофилы, прони­кающие в мочу из очагов воспаления, расположенных в почке, называют «активными».

При понижении осмотичес­кого давления мочи проникновение воды в активные лейко­циты усиливается, что ведет к увеличению их размеров в 1,5—2 раза и подвижности гранул протоплазмы.

Шаг первый: Для выявления активных лейкоцитов к осадку мочи добавляют каплю дистиллированной воды и каплю насыщенного раствора краски сафранина или эозина. Эти лейкоциты активно впитывают воду.

Сафранин в них не проникает, и они остаются бледно-серыми, тогда как «мертвые» лейкоциты окрашиваются.

Шаг второй: Препарат рассматривают под микроскопом при увеличении в 40 раз или с иммерсионной системой. Подсчитывают число активных клеток на 100 лейкоцитов. При пиелонефрите выявляется 70—80 % ак­тивных лейкоцитов. При других заболеваниях почек их количество не превышает 10 %.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БАКТЕРИУРИИ

Для более достоверной диагностики микробно-воспалительных заболеваний мочевой системы (пиелонефрит, пиелит, пиелоцистит) важно убедиться в участии в пато­логическом процессе инфекции.

Шаг первый: Бактериологическое исследование требует получения мочи с помощью катетера и представляет собой длительный процесс. В свя­зи с этим были предложены методы выявления истинной бактериурии с помощью химических проб.

Реакция на нитриты.

Шаг первый: Под влиянием жизнедеятельности бактериальной флоры добавленные в мочу нитраты пере­ходят в нитриты. Обнаруживают их следующим образом: к 1 мл мочи прибавляют 0,04 мл раствора калия нитрата, после чего пробу инкубируют в термостате в течение 4— 6 ч при температуре 37 °С.

Шаг второй: Затем к пробе прибавляют 1 мл смеси, состоящей из растворов А и Б. В раствор А входят сульфаниловая кислота — 1,25 г, уксусная кислота 30% —500 мл; в раствор Б: альфанафтиламин — 2,5 г, уксусная кислота 30 % — 500 мл. Реакция считается положительной (указывающей на наличие в моче нит­ритов) при появлении красного или розового окраши­вания.

В норме у здоровых детей и взрослых число бактерий в 1 мл мочи не превышает 100 000. При инфекции мочевых путей бактериурия более выражена.

Определение патологической бактериурии по ускорен­ной реакции на нитриты.

Шаг первый: Для реакции готовят свежий реактив Касаткина, который состоит из риванола в разве­дении 1:1000 и хлористоводородной кислоты—12% раствор.

Шаг второй: Свежую утреннюю мочу в количестве 1 мл помещают в стерильную пробирку и прибавляют одну каплю 5 % раствора калия нитрата.

Шаг третий: Пробу помещают в термостат на 6 ч при температуре 30 °С, затем добавляют 0,2 мл риванолового реактива. Появление розовой окраски свидетельствует о том, что в 1 мл мочи содержится 100 000 и более микробных тел.