Подсчет общего числа колоний

Микроскопические исследования

 

Приготовление питательных сред

В работе использовали плотную питательную среду рыбопептонный агар (РПА). Для проведения посева необходимо было приготовить 300 мл среды. 11,4 г порошкообразной готовой среды размешивали в 300 мл дистиллированной воды, затем кипятили 1-2 минуты до полного расплавления агара, фильтровали через марлевый фильтр. После стерилизации среду охлаждали до температуры 45 - 50 ^о С.

 

Взятие смывов

Для взятия смывов использовались пробирки с пробкой и ватным тампоном.

Смывы брали с кожи лица в стерильную воду с помощью ватного тампона. Также проводили контрольный анализ мыла и крема, использованных в эксперименте. После взятия смыва воду в пробирке аккуратно перемешивали.

Смывы можно хранить не более 2 часов.

 

Посев

 

После взятия смывов проводили глубинный посев на плотную питательную среду РПА. В центр чашки стерильно помещали 1 мл. смывной жидкости, после чего заливали средой (температура среды = 45 - 50 ⁰ С) и оставляли до застывания. Чашки с застывшей средой оставляли на сутки при температуре 20 ⁰ С - для выявления симбиотических микроорганизмов и при температуре 37 ⁰ С для выявления условно патогенных микроорганизмов.

 

Подсчет общего числа колоний

 

Через сутки после проведения посева проводили подсчет общего числа колоний микроорганизмов, что позволило определить число микроорганизмов в 1 мл пробы.

 

Микроскопические исследования

Для проведения микроскопических исследований сделали мазки культур микроорганизмов. Для этого на предметные стекла нанесли небольшое количество воды, а затем с помощью микробиологической петли сделали мазки. Когда мазки полностью высохли, зафиксировали их, пронося над пламенем горелки.

Мазки окрашивали по Грамму. Процедура окрашивания по Грамму начинается с обработки фиксированных бактериальных клеток, основным красителем (генцианвиолет) на 1 минуту для протекания реакции. Стекло в наклонном положении промывали несколько секунд водой; наносили раствор йода (люголя) на 1 минуту; промывали водой; наносят не 30 секунд спирт (этанол); промывали водой; наносили фуксин на 1 минуту; по истечении времени промывали водой; сушили.

Результаты окраски:

Гр + – бактерии окрашиваются основным красителем в темно – фиолетовый цвет (до синего).

Гр – – воспринимает допустимую окраску, цвет от ярко – малинового до красного.

Перед микроскопированием на окрашенные мазки наносили иммерсионное масло.

Микроскопирование проводили с помощью иммерсионного объектива.

 

 

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ

 

Объектом исследований в данной работе были смывы с кожи лица. Всего в эксперименте участвовало 11 образцов:

· 1-3 - смывы с кожи лица трех испытуемых без предварительной обработки кожи косметическими средствами.

· 4 - смыв с мыла, находившегося до начала эксперимента в герметичной упаковке.

· 5-7 - смывы с кожи лица через 1,5 часа после умывания.

· 8 - контрольная проба крема, находившегося до начала эксперимента в герметичной упаковке.

· 9-11 - смывы с кожи лица через 1,5 часа после обработки кожи кремом.

Для эксперимента было выбрано туалетное мыло марки «Невская косметика» и крем для лица марки «Чистая линия».

После проведения глубинного посева пробы были помещены в термостат при 37 ⁰С для определения патогенных микроорганизмов и при 20 ⁰ С для определения симбиотической микрофлоры кожи. Через 24 часа производился подсчет общего микробного числа. Результаты занесены в таблицу.