Методы диагностики вирусных инфекций.

Для диагностики вирусных заболеваний применяют следующие методы:

1. Вирусоскопический.

2.Иммунной электронной микроскопии.

3. Вирусологический.

4.Серологический.

5. Иммунофлуоресцентный.

6. Биологический.

7. Использование ДНК- (РНК) - зондов.

8. Цепная полимеразная реакция.

При вирусоскопическом методе в исследуемом материале обнаруживают с помощью электрон­ной микроскопии вирионы или с помощью светооптической микроскопии — внутриклеточные включе­ния. Метод электронной микроскопии дает возможность обнаружить вирионы, но он недостаточно специфичен.

Гораздо более специфичным, чувствительным и надежным является метод иммунной элект­ронной микроскопии. Он оказался особенно ценным в обнаружении тех вирусов, которые не размножаются в культуре клеток и для которых нет других тест-систем. В основе этого метода лежит взаимодействие антител с вирусами при смешивании вируссодержащего материала со специфической сывороткой. В результате взаимодействия антител с вирусами образуются микро­преципитаты, состоящие из вирусных частиц, покрытых своеобразным «венчиком». Специфич­ность агрегации вирионов антителами позволяет надежно их идентифицировать. Разрешающая способность метода возрастает благодаря тому, что образование иммунных агрегатов повышает концентрацию вирионов в микропрепарате. Сам процесс иммунной электронной микроскопии включает следующие процедуры:

1) приготовление водного экстракта исследуемого материала и смешивание его с соответствующим объемом специфической сыворотки;

2) осаждение образующихся микропреципитатов центрифугированием;

3) негативное контрастирование иммунного преципитата фосфорно-вольфрамовой кислотой;

4) нанесение материала на сеточку;

5) просмотр препарата в электронном микроскопе.

Единственный недостаток этого метода заключается в его громоздкости, поэтому он не может быть использован для массовых исследований.

Вирусологический метод основан на выделении вирусов и их идентификации с использова­нием культур клеток или куриных эмбрионов. Для проведения вирусологического исследования важное значение имеют: выбор материала и его предварительная обработка, условия транспорти­ровки и соблюдение необходимых условий для культивирования вируса. Материал для исследо­вания определяется характером вирусного заболевания, местом размножения вируса в организме и путями его выделения. В соответствующих главах указано, при каких заболеваниях какой материал необходимо брать для выделения вируса. Для подавления возможного роста бактерий исследуемый материал обрабатывают антибиотиками, или последние добавляют в питательную среду для выращивания культуры клеток в соответствующих концентрациях. Выбор способа культивирования (заражение лабораторных животных, куриных эмбрионов или культур клеток) определяется биологией предполагаемого возбудителя. Важное значение имеет соблюдение стан­дартных условий культивирования: оптимальная температура, продолжительность, использование дополнительных тестов для индикации (бляшкообразование, реакции гемадсорбции, гемагглютинации, иммунофлуоресценции и т. д.). Для идентификации вирусов применяются типоспецифические сыворотки.

Серологические методы могут быть использованы для обнаружения в исследуемом материале как специфических антител, так и вирусных антигенов. Для этих целей могут быть использованы все известные серологические реакции:

1. Реакция связывания комплемента.

2. Реакция пассивной гемагглютинации и ее варианты.

3.Реакция торможения гемагглютинации.

4.Реакция гемагглютинации иммунного прилипания (комплекс антиген+ антитело в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах).

5. Реакции преципитации в геле.

6.Реакции нейтрализации вирусов.

7. Радиоиммунный метод.

8. Методы иммуноферментного анализа.

Из перечисленных методов все большей популярностью пользуются методы иммуноферментного анализа, отличающиеся высокой специфичностью и удобством использования.

Иммунофлуоресцентный метод, применяемый в прямом и обратном вариантах, является мето­дом ускоренной диагностики.

Биологический метод основан на использовании животных, чувствительных к соответствующе­му вирусу.

Метод гибридизации ДНК-ДНК, или метод ДНК-зондов — один из наиболее перспек­тивных способов исследования в современной биологии и медицине. Он может быть использован для выявления любых генов, любых фрагментов нуклеиновых кислот. В его основе лежит способ­ность однонитевых молекул нуклеиновых кислот вступать во взаимодействие с комплементарны­ми нитями и образовывать двунитевые гибридные молекулы. Гибридизация осуществляется или в растворах, или, чаще всего, на твердых подложках, таких, например, как нитроцеллюлозная мембрана. Исследуемую клеточную суспензию лизируют для высвобождения нуклеиновых кис­лот. После этого двухцепочечную ДНК предварительно денатурируют, а образующиеся одноцепочечные молекулы переносят на мембрану, где они ковалентно связываются с ДНК-зондом, кото­рый представляет собой меченные изотопом или ферментом денатурированные молекулы нуклеиновой кислоты. Гибридизация происходит лишь в том случае, если между зондом и иммобилизованной на мембране нитью ДНК имеется гомология.

Метод цепной полимеразной реакции (ЦПР) охарактеризован выше.

 

Тестовые задания:

1. вирусы культивируют:

1) в МПА

2) в курином эмбрионе

3) в среде 199

4) на тканевых культурах

5) в лабораторных животных

2. Для идентификации вирусов используют:

1) цветную пробу

2) реакцию торможения гемагглютинации

3) реакцию нейтрализации цитопатического действия вирусов

4) реакцию связывания комплемента

5) реакцию пассивной гемагглютинации

3. Для индикации вирусов используют:

1) цветную пробу

2) реакцию нейтрализации

3) реакцию гемагглютинации

4) реакцию торможения гемадсорбции

4. Для диагностики вирусных инфекций используют:

1) бактериологический метод

2) вирусологический метод

3) вирусоскопический метод

4) микологический метод

5) серологический метод

5. компоненты, участвуюЩИЕ в реакции торможения гемадсорбции:

1) монослой клеток

2) исследуемый материал с вирусом

3) эритроциты

4) бактерии

5) диагностическая противовирусная сыворотка

6) диагностическая антибактериальная сыворотка

6. препараты, используЕМЫЕ для специфической профилактики вирусных инфекций:

1) антибиотики

2) вакцины

3) γ-глобулины

4) витамины

7. интерферон обладает СЛЕДУЮЩИМ действием

1) противоопухолевым

2) противовирусным

3) противопротозойным

4) иммуностимулирующим

5) антибактериальным