Определение общего количества бактерий группы кишечной палочки - БГКП

Метод мембранных фильтров

Этот метод применяют для определения БГКП. Почвенную суспензию, приготовленную так же, как в предыдущем исследовании, (см. определение общего количества микроорганизмов в почве), разводят от 1:10 до 1:1000 при исследовании чистых почв и от 1:1000 до 1:1000000 – при изучении загрязненных почв. Затем 5 или 10 мл полученных разведений фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор не более 0,45 мкм в аппарате Зейтца. Фильтры помещают на среду Эндо, в состав которой входят мясопептонный агар, лактоза и индикатор и инкубируют в термостате при температуре 37º С в течение 24 ч. При наличии бактерий группы кишечной палочки на фильтрах появляется рост колоний темно-красного цвета с металлическим блеском. Из колоний готовят мазки, окрашивают их по Граму, и микроскопируют. БГКП имеют палочковидную форму и при окраске приобретают красный цвет (т.е. являются грамотрицательными). Затем с культурой грамотрицательных лактозоположительных бактерий ставят оксидазный тест, который позволяет дифференцировать представителей семейства Enterobacteriaceae и Pseudomonadaceae. У микроорганизмов, продуцирующих оксидазу, цвет колонии становится сине-фиолетовым. Бактерии группы кишечной палочки являются оксидазоотрицательными и не изменяют своего цвета. Дополнительно проверяют способность исследуемой культуры ферментировать глюкозу и разлагать белки. Колонии, выросшие на фильтрах на среде Эндо, учитывают как БГКП, если они образованы грамотрицательными, оксидазонегативными палочками, ферментирующими глюкозу до кислоты и газа и не разлагающими белки.

Для определения общего количества БГКП в исследуемой почве, подсчитывают количество колоний, выросших на фильтре, через который был пропущен определенный объем разведения почвенной болтушки. Затем вычисляют, сколько бактерий группы кишечной палочки содержится в одном миллилитре этого разведения. Общее количество БГКП подсчитывают, умножая показатель содержания этих микроорганизмов в 1 мл на соответствующее разведение.

Пример: Было профильтровано 10 мл из разведения 1:10000. На фильтре выросло 20 колоний. Составляем пропорцию: В 10 мл -20 бактерий, а в одном – х.

Получаем результат: Х= (20 × 1): 10 = 5 бактерий. Поскольку проба для фильтрования была отобрана из разведения 1:10000, умножаем 5 на 10000. Окончательный итог – в 1 г почвы содержатся 50000 БГКП.

Контрольные вопросы

1. Какие микроорганизмы называются санитарно-показательными?

2. Что такое «микробное число» и как его определяют?

3. Назовите санитарно-показательные микроорганизмы, по наличию которых в воздухе можно определить его загрязненность

4. В каких помещениях проводятся обязательные исследования воздуха с целью выявления санитарно-показательных микроорганизмов?

5. В чем суть седиментационного метода Коха для изучения микробной загрязненности воздуха?

6. Опишите принцип работы аппарата Кротова, применяемого для изучения бактериальной обсемененности воздуха аспирационным методом.

7. Назовите основные типы водоисточников, которые могут использоваться человеком для хозяйственно-питьевых нужд?

8. От чего зависит качество природной воды?

9. Какие водоисточники наиболее безопасны с точки зрения возможности их загрязнения?

10. Какие виды исследований проводятся для оценки качества воды?

11. Какие вопросы, кроме качества самой воды, изучаются при оценке потенциальной возможности загрязнения водоисточника?

12. Какие показатели качества воды относятся к органолептическим?

13. Почему возможности самоочищения водоемов сильно снижаются при сбросе в них теплых промышленных вод?

14. Какие показатели определяют при санитарно-микробиологическом исследовании воды?

15. Дайте характеристику бактерий группы кишечной палочки (БГКП). Какой метод используют для выявления БГКП в воде?

16. Наличие каких бактерий в воде свидетельствует о свежем фекальном определения загрязнении воды?

17. Назовите основные правила отбор проб воды для бактериологических исследований.

18. Опишите бродильный метод микробиологического изучения БГКП в воде.

19. Расскажите об устройстве фильтра Зейтца и принципе изучения БГКП в воде мембранным способом.

20. Опишите порядок отбора проб почвы.

21. Как определяется в почве общее количество микроорганизмов (общее микробное число)?

22. В чем состоит суть метода прямого подсчета общего количества микроорганизмов в почве по Виноградскому?

23. Определение общего количества бактерий группы кишечной палочки (БГКП) методом мембранных фильтров