Промикроскопируйте демонстрационный препарат из культуры №4. Окраска по Лейфсону для выявления жгутиков. Полученный результат занесите в протокол и сделайте вывод.

Окраска жгутиков по Лейфсону: петлей забирают микробную массу из конденсата 18-часовой агаровой культуры и вносят в пробирку с 2 мл дистиллированной или водопроводной воды. Не взбалтывая и не встряхивая, ждут, пока вода не помутнеет, после чего суспензию оставляют в штативе на 5-7 мин. Тем временем на хорошо обезжиренном стекле восковым карандашом рисуют прямоугольник, занимающий 2/3 стекла. Каплю суспензии наносят на предметное стекло в начале прямоугольника и, наклоняя стекло, дают ей стечь в противоположную сторону. Препарат высушивают на воздухе.

На сухой препарат наливают смесь равных объемов гипертонического раствора хлорида натрия и танина; протравливание продолжают в течение 5 мин. Смесь сливают, осторожно промывают водой и докрашивают раствором розалинина 2-3 мин. Промывают водой, высушивают на воздухе.

Ожидаемый результат: у большинства бактерий толщина жгутиков не превышает 10-30 нм, т. е. жгутики находятся за пределами разрешающей способности обычного микроскопа. Поэтому в основе всех методов их выявления, в том числе и метода Лейфсона, лежит искусственное увеличение размеров жгутиков за счет нанесения протравы, что позволяет увидеть их при иммерсионной микроскопии.

При микроскопии демонстрационного препарата нужно обратить внимание не только на количество и характер расположения жгутиков, но и на морфологию изучаемой культуры.

5. Подготовка к 1 этапу бактериологического метода выделения чистых культур аэробов:

1.1. Посеять исследуемый материал методом «штрих с площадкой».

5.4. Итоговый контроль знаний:

-вопросы для самоконтроля:

1. Какой метод окраски является основным для изучения морфо-тинкториальных свойств бактерий и почему?
2. Обоснуйте, какие структуры (обязательные или необязательные) имеют дифференциально-диагностическое значение при изучении микроорганизмов.
3. Почему негативный метод является основным при выявлении капсул у бактерий. Назовите микроорганизмы, образующие макрокапсулы.
4. Как будет выглядеть препарат из культуры спорообразующих бактерий, окрашенный по методу Грама и почему?
5. Обоснуйте возможность использования спор бактерий для биологического контроля режима стерилизации автоклава.
6. Для каких бактерий выявление зерен волютина имеет дифференциально-диагностическое значение?
7. Какими косвенными методами можно выявить наличие жгутиков у микроорганизмов?

6. Домашнее задание для уяснения темы занятия:

1. Понятие «эукариоты» и «прокариоты», их отличия; ультраструктура бактериальной клетки и методы, позволяющие ее изучить.

1. Обязательные и необязательные структурные элементы микробной клетки.
2. Особенности строения клеточной стенки у Грам(+) и Грам(-) бактерий. L-формы, протопласты, сферопласты.
3. Строение, расположение, химический состав капсулы бактерий.
4. Органоиды движения у бактерий (жгутики), классификация микроорганизмов на основании их количества и расположения; методы выявления.
5. Включения в бактериальной клетке, их разновидности, химический состав и функции. Диагностическое значение обнаружения некоторых из них (например: зерна волютина)
6. Споры бактерий, химический состав, спорообразование и его биологическая роль, расположение спор в микробной клетке (центрально, субтерминально, терминально), методы окраски и выявления спор.

8. Значение выявления структурных элементов бактерий в идентификации микроорганизмов.

7. Рекомендации по выполнению НИРС:

Темы рефератов:

1. Обязательные структурные элементы бактерий и выполняемые ими функции.
2. Необязательные структурные элементы бактерий и выполняемые ими функции.
3. Значение L-трансформации в патогенезе инфекционных заболеваний.
4. Проблемы диагностики инфекционных заболеваний, вызванных L-формами.

8. Рекомендуемая литература по теме занятия:

Обязательная

1. Поздеев, О. К. Медицинская микробиология: Учебник / О. К. Поздеев; ред. В. И. Покровский. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. – 768 с.

Дополнительная

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник. в 2 т. / ред. В. В. Зверев, M. Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011 – Т. 1. – 448 с.

2. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник. в 2 т. / ред. В. В. Зверев, М. Н. Бойченко. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 2. - 480.

3. Гиллеспи, С. Х. Наглядные инфекционные болезни и микробиология / С. Х. Гиллеспи, К. Б. Бамфорд; ред.-пер. С. Г. Пак, А. А. Еровиченков. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 136 с.

4. Хаитов, Р. М. Иммунология: учебник / Р. М. Хаитов. – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 528 с.

5. Ярилин, А. А. Иммунология: учебник / А. А. Ярилин. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 752 с.