Определение концентрации спермиев

Концентрация спермы – это количество спермиев в одном миллилитре эякулята, взятого у самца производителя за одну садку.

Визуальная оценка густоты спермы дает приблизительное представление о фактическом количестве спермиев в 1 мл спермы, что не позволяет установить с большей точностью степень ее разбавления. Более точно можно определить концентрацию спермиев в камере Горяева, фотоэлектроколомеирически, методом стандартов и др.

Определение концентрации спермы в камере Горяева

Порядок работы.

Для подсчетов спермиев чистую счетную камеру и шлифовальное покровное стекло обеззараживают спиртовым тампоном и эфиром, после чего протирают сухой марлевой салфеткой. Смесители промывают дистиллированной водой, затем 96%-ным спиртом и эфиром, просушивают продуванием воздуха резиновой грушей.

В эритроцитный смеситель набирают сперму быка до деления 1,0 и сперму барана до деления 0,5. Сперму хряка и жеребца набирают в лейкоцитарный смеситель до деления 0,5. После этого в смеситель наливают 3%-ный раствор хлорида натрия до деления 101 (в эритроцитный) или до деления 11 (в лейкоцитный). Зажимают оба конца смесителя большим и указательным пальцами и встряхивают в течение 2 – 3 мин. Перемешав разбавленную сперму, удаляют из смесителя четыре капли жидкости. Этим достигается удаление из капилляра смесителя раствора, не смешанного со спермой. Хорошо притирают покровное стекло к сетке камеры Горяева и наносят сбоку на сетку небольшую каплю разбавленной спермы. Камеру помещают на предметный столик микроскопа, отыскивают большой квадрат сетки камеры и проводят подсчет в пяти больших квадратах (80 малых) по диагонали. Считают только головки спермиев, расположенных внутри малых квадратиков и лежащих на их левых и верхних линиях (рис.8). Концентрацию спермиев вычисляют по формуле, которая после проведения сокращений приобретает следующий вид:

для быка С= П/200;

для барана С= П/100;

для хряка и жеребца С= П/1000,

где С – концентрация спермиев, млрд/мл; П – число подсчитанных спермиев в 5 больших квадратах.

       Для достижения большей точности результатов подсчет спермиев рекомендуется проводить 2 раза.

Рис. 8 Сетка счетной камеры (а) и техника подсчета спермиев в одном большом квадрате (б).

Определение концентрации спермиев при помощи фотоэлекрокалориметра (ФЭК-М)

Данный метод связан с использованием специального прибора – фотоэлектрокалориметра ФЭК-М (рис.9). Метод основан на том, что пучок света, пропущенный через кювету со спермой, попадая на селеновый фотоэлемент, отклоняет стрелку гальванометра. Степень отклонения стрелки зависит от силы электрического тока, проходящего через гальванометр, которая обратно пропорциональна мутности спермы. При помощи ФЭК-М достаточно точно и быстро (1-2 мин.) можно подсчитать концентрацию спермиев.

Рис. 9 Фотоэлектрокалориметр ФЭК-М:

1 – левая шкала отсчетного барабана; 2 – гнезда держателей; 3 – правая шкала оптической плотности; 4 – рукоятка отсчетного барабана; 5 – рукоятка светофильтра; 6 – рукоятка нейтральных клиньев; 7 – рукоятка включения гальванометра; 8 – клеммы для подключения гальванометра; 9 и 10 – держатели кювет; ЛВ и ПР – левый и правый кюветодержатели.

Определение концентрации методом стандартов

Данный метод   заключается в следующем. Спермин менее проз­рачны, чем плазма, от их концентрации зависит прозрачность спермы.

Стандарт для спермы жеребца (Г. В. Паршутин, Е. Ю. Румянцева) включает в себя 6 небольших запаянных пробирок, содержащих жид­кость, степень прозрачности которой соответствует определенной кон­центрации спермиев. К стандарту прилагается пустая пробирка, в кото­рую наливают 1,5...2 мл исследуемой спермы. Встряхнув стандарты, подбирают один из них, сходный по прозрачности с анализируемым об­разцом.

По такому же принципу определяют концентрацию спермиев в сперме быка.

Стандарт для спермы хряка (С. И. Сердюк) состоит из одной запаян­ной пробирки, прозрачность которой соответствует концентрации спермиев 5 млн/мл. В пробирку, содержащую 1 мл спермы, добавляют 1%-й раствор хлорида натрия до тех пор, пока прозрачность не станет в обеих пробирках одинаковой.

После этого определяют концентрацию спермиев по формуле

С_х = 50(Н + 0,1),

где С — концентрация спермиев в цельной сперме, млн/мл; Н — объем добавленного к ней 1%-го раствора хлорида натрия, мл.