Прижизненная окраска бактерии.

Для такой окраски применяются сильно разбавленные растворы красителей, которые не оказывают токсического действия на бактерии. На предметное стекло нанести каплю 0,001% раствора метиленового синего,в которую внести взвесь бактерий,после чего приготовить препарат "раздавленная капля" и микроскопировать его.

 

Приготовление фиксированных препаратов.

Для фиксации мазков высушенный препарат проводят через пламя горелки 3-4 раза,при чем в пламени нельзя выдерживают препарат больше 2 с. Если фиксация произошла правильно,то стекло при прикосновении с тыльной поверхностью руки тотчас после окончания процесса слегка обжигает кожу.

 

Простой метод окраски препаратов.

Простой метод окрашивании мазков заключается в окрашивании мазков одним красителем и ознакомлением с общей морфологией микробов. Доя окраски используют: метиленовый синий,кристаллический фиолетовый,фуксин,гематоксилин и тд.

 

Окраска по методу Грамма.

1)на фиксированный препарат поместить полоску фильтровальной бумаги и на нее нанести раствор карболового генцианвиолета на 1-2 мин.

2)краситель слить,снять фильтровальную бумагу и обработать препарат в течение 1-2 мин. раствором Люголя до почернения препарата.

3) слить раствор Люголя и на препарат нанести несколько капель этилового спирта на 30-60 с.

4)помыть водой и докрасить препарат водным фуксином в течение 1-3 мин.

5)слить окраску,промыть водой,высушить и микроскопировать препарат с иммерсионной системой.

Граммположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет,а граммотрицательные- в красный или розовый.Сушность метода заключается в том что клеточная стенка грамм+ бактерий прочно фиксирует комплекс генцианвиолет-раствор Люголя,не обесцвечиваются этанолом и поэтому не воспринимает дополнительный краситель,а грамм- наоборот обесцвечиваются этанолом и поэтому имеют дополнительную окраску.

 

Выявление капсулы по методу Бури-Гинса.

1) на край предметного стекла нанести каплю туши,а рядом каплю исследуемой культуры. Капли быстро перемешать и с помощью шлифованного стекла приготовить тонкий мазок.

2)после высушивания мазок фиксировать над пламенем и окрасить фуксином в течении 1-2 мин.

3)осторожно помыть водой и высушить. Бактерии окрашиваются в красный цвет,капсула не окрашивается и имеет вид светлой зоны вокруг бактерии Га темном фоне. 

Бактериологический метод: посев исследуемого материала на чашки Петри с плотной питательной средой - шпателем(метод Дригальского).

Берут три чашки Петри с плотной питательной средой. На середину первой петлей вносят каплю исследуемого материала и круговыми движениями шпателя производят сплошной посев. Этим же шпателем не стерилизуя его, распределяют материал по второй третьей чашкам.

 

Петлей (по Гольду)

Посев производится следующим способом: делается 4-5 параллельных штрихов в направлении А, затем петля прожигается в пламени горелки и ею проводятся штрихи в направлении Б поперек первоначально нанесенных полос. Петля снова прожигается и делаются штрихи в направлении В а затем Г.

 

Отсев культур в пробирку с плотной питательной средой методом " укола "

Используют высокий столбик плотной или полужидкой питательной среды, полускошанные питательные среды. Во всех случаях бактериальной петлей с посевным материалом делают прокол среды с поверхности до дна. Пробирку держать верх дном чтобы не наступила контаминация среды воздушной микрофлорой.

 

В пробирку со скошенным агаром.

На скошенные среды переносят культуру с колоний на чашках. Для этого необходимо приподнять крышку чашки Петри и стерильной петлей прикоснуться к колонии. После этого берут пробирку со скошенным агаром и так, чтобы поверхность скошенного агара была перед глазами. Пробирку открывают над пламенем горелки и обжигают ее край, а затем петлю вводят в пробирку до дна, где имеется не небольшое количество конденсационной воды. Плоской поверхностью петли прикасаются поверхности агара и делают посев штрих образными движениями, постепенно продвигаюсь снизу вверх. Обжигают в пламени горелки край пробирки и пробирку, закрывают пробирку над пламенем.... В пробирку с жидкой питательной средой.