Выделение и исследование вируса

Окончательный диагноз лихорадки Эбола основывается на выделении и идентификации вируса на культурах тканей или при помощи ПЦР (полимеразной цепной реакции) с обратной транскрипцией. Однако данные исследование сопряжены с высоким риском инфицирования, а кроме того, они требуют особых условий. На сегодняшний день выделение и исследование вируса осуществляется всего в нескольких лабораториях в мире.

Серологические анализы

С помощью серологического исследования определяется тип и концентрация специфичных антител, которые вырабатываются иммунными клетками инфицированного человека.
Антитела представляют собой белки особой конфигурации, которые синтезируются в иммунных клетках, и которые способны специфично связываться с патогенными агентами, инактивируя их и делая их более заметными для фагоцитов (иммунные клетки, способные поглощать вирусы и бактерии). Синтез антител проходит через две последовательные фазы – изначально синтезируются белки типа IgM, ответственные за краткосрочный, экстренный иммунитет, максимальная концентрация которых приходится на конец первой – начало второй недели заболевания. Через полторы – две недели данные белки сменяются антителами класса IgG, ответственные за долгосрочный иммунитет. В условиях молниеносной эволюции лихорадки Эбола, при которой иммунные клетки значительно ингибируются, иммунный ответ далеко не всегда является достаточным.

Для диагностики лихорадки Эбола используют следующие методы выявления антител:

· Непрямой иммунофлюоресцентный анализ. Метод непрямой иммунофлюоресценции позволяет выявлять антитела в сыворотке человека путем проведения реакции между сывороткой и известным антигеном (частицы вируса). После данной реакции в систему вводятся специальные меченые иммуноглобулины, которые присоединяются к антителам, если они вступили в реакцию с антигеном. После смывания непрореагировавших частиц проводится микроскопия в специальном микроскопе, который позволяет фиксировать свечение меченых частиц. Данный метод связан с довольно высоким процентом ложноположительных результатов.

· Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA). Иммуноферментный анализ позволяет не только выявлять специфические антитела, но и определять их тип. В основе метода лежат несколько последовательных стадий. Изначально, на специальной пластине производят фиксацию антитела. К получившейся системе добавляют антигены, меченые ферментом. Через некоторое время пластину промывают для удаления не вступивших в реакцию частиц, а затем добавляют в нее специфичный для фермента субстрат и вещество, способное изменять цвет при изменении среды. Если антитела вступили в реакцию с антигенами, то они остались в системе и, соответственно, прикрепленный к ним фермент расщепит субстрат и вызовет изменение среды с изменением цвета раствора. По интенсивности окраски можно судить о концентрации антител (титр антител). Данный метод диагностики является крайне специфичным и чувствительным.

· Реакция связывания комплемента. Система комплемента представляет собой особую систему, ответственную за разрушение патогенных клеток. Реакция связывания комплемента основывается на том факте, что комплемент присоединяется к комплексу антиген-антитело. Связанный комплемент не способен вступить в реакцию с гемолитической сывороткой, которая добавляется во второй фазе анализа и, соответственно, не способен вызвать разрушение эритроцитов в системе. Благодаря этому становится возможным визуализация реакции и выявление специфичных антител.

· Реакция непрямой гемагглютинации. Суть реакции непрямой гемагглютинации состоит в том, что при взаимодействии антител с антигенами, прикрепленными к поверхности эритроцитов, формируется устойчивый комплекс, который «склеивает» эритроциты между собой. В результате при положительной реакции эритроциты выпадают в осадок.

Необходимо отметить, что из-за высокого риска инфицирования, все анализы должны осуществляться в специальных лабораториях в условиях тщательного соблюдения противоэпидемиологических мероприятий.