Тема: Количественное определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови

Цель: Изучить активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови, ее значение для диагностики гепатита.

Принцип метода : Аминотрансферазы или трансаминазы катализируют межмолекулярный перенос аминогруппы с амнокислот на кетокислоты. Коферментом трансаминаз является фосфопиридоксаль, который служит непосредственным переносчиком аминогрупп с аминокислоты на кетокислоту. АлАТ катализирует реакцию переаминирования между аланином и a-кетоглутаровой кислотой:

α - кетоглутарат

Аланин

Глутамат

пируват

По количеству образовавшейся пировиноградной кислоты можно судить об активности фермента. Количество пировиноградной кислоты определяется колориметрическим путем по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином, при которой развивается красно-бурое окрашивание:

Пируват

2,4-ДНФГ

2,4-ДНФ-гидразон пирувата

Повышение активности АлАТ наблюдается при заболеваниях печени, а повышение активности АсАТ – при патологии сердечной мышцы.

Активность АлАТ в норме составляет 28 – 190 нмоль/с × л

Схема постановки опыта

	Контрольная проба	Опытная проба
Реагент 1 (АлАТ, субстрат), мл	0,25	0,25
Дистиллированная вода, мл	0,05	–
Сыворотка, мл	–	0,05
Перемешать и инкубировать 30 мин
Реагент 2 (динитрофенилгидразин), мл	0,25	0,25
Перемешать и оставить при комнатной температуре на 20 мин
NaOH (С = 0,4 моль/л), мл	2,5	2,5

Перемешать и через 10 минут измерить оптическую плотность пробы против контрольной пробы при длине волны 540 нм, кювета с толщиной слоя 5 мм. Активность АлАТ в опытной пробе определить по калибровочному графику в нмоль/с×л.

Результат анализа:

Вывод:

Дата:                                                                               Подпись преподавателя:

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ 4

Семинар Патологии белкового обмена

Вопросы для подготовки к семинару:

1. Нарушения азотистого баланса

2. Нарушения переваривания белков в желудке и кишечнике

3. Нарушения обмена аммиака. Гипераммониемия

4. Нарушения синтеза мочевины

5. Нарушения обмена фенилаланина и тирозина

6. Гиповитаминозы витаминов – участников обмена белка

7. Патологии печени и их влияние на обмен белков

8. Нарушения катаболизма пуриновых нуклеотидов. Подагра

9. Проблемы синтеза коллагена

10.  Наследственные заболевания белкового обмена

 

 

ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ 6

Тема: Обмен сложных белков

Задания для подготовки к занятию:

1. Выберите положения, правильно характеризующие функции АТФ в организме:

А. Продукт окислительного фосфорилирования

Б. Источник энергии при связывании аа-тРНК с рибосомой

В. Субстрат аденилатциклазы

Г. Регулятор метаболических процессов

Д. Донор фосфата в реакциях, катализируемых протеинкиназами

Е. Источник энергии для транспорта веществ путем облегченной диффузии

2. Нарисуйте пуриновое кольцо и покажите происхождение в нем отдельных атомов.

3. При катаболизме пуриновые основания превращаются в мочевую кислоту, используя цифровые обозначения, расположите перечисленные метаболиты в порядке их превращения в мочевую кислоту:

1. АМФ; 2. мочевая кислота; 3. ксантин; 4. инозин; 5. аденозин; 6. гипоксантин.

 

 

5. Напишите схему синтеза гема.

7. Напишите схему катаболизма гема до образования конечных продуктов, выделяемых из организма.

 

1. Заполните таблицу дифференциальной диагностики различных типов желтух

Название желтухи	Причины возникновения	Биохимические показатели обмена билирубина
		кровь			моча		кал
		общий билирубин	непрямой билирубин	прямой билирубин	прямой билирубин	уробилин	стеркобилин

 

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 15