Лабораторная работа №1. Обнаружение этилового спирта в содержимом желудка лабораторных животных

Этиловый спирт C₂H₅OH (этанол, этиловый алкоголь, винный спирт) – бесцветная, летучая жидкость с характерным запахом, жгучая на вкус, т. кип. 77-77,5⁰С, горит синим пламенем, во всех отношениях смешивается с водой, диэтиловым эфиром, и многими органическими растворителями, перегоняется с водяным паром.

Полученный брожением крахмалсодержащих продуктов, фруктов, сахара, этанол отгоняют; спирт-сырец очищают ректификацией. Спирт-сырец и самогон, изготовленный в домашних условиях, содержат некоторое количество сивушных масел, относительно медленно метаболизирующихся в организме. Этанол широко используется в промышленности (как растворитель и исходное вещество для получения ряда химических соединений), в медицине как дезинфицирующее средство, в фармации, входит в состав спиртных напитков. Ориентировочная летальная доза - 6- 8 мг чистого этанола на 1 кг массы тела или 200-300 мл в пересчете на всю массу тела непьющего человека. Этанол локализуется в головном мозге, печени, почках, поражает сердечно-сосудистую, нервную системы, вызывает цирроз печени, психозы. Спирт - наркотик, оказывающий возбуждающее, а затем угнетающее действие на нервную систему. 90 % поступившего в организм этанола (при приеме внутрь, внутривенном введении, с вдыхаемым воздухом) метаболизируется ферментами алкогольдегидрогеназой и альдегидоксидазой до СО₂ и Н₂О, до 10 % - выделяется в неизменном виде с мочой, выдыхаемым воздухом, слюной, потом.

В последние годы острые отравления этиловым спиртом занимают первое место – около 75 % среди отравлений другими токсикантами.

При исследовании органов на наличие этанола, его отгоняют с водяным паром; обнаружение этилового спирта проводят при помощи описанных ниже реакций. Для обнаружения этилового спирта в крови и моче, напитках, растворах применяют метод газожидкостной хроматографии.

Получение биоматериала для исследований и отгонка этанола с водяным паром.

Материалы и оборудование.

Желудок и его содержимое белой лабораторной крысы – 2 шт.

Ход работы.

Желудок крыс вместе с его содержимым измельчают ножницами и переносят в прибор для перегонки с водяным паром. Колбу с содержимым нагревают и перегоняют этанол с водяным паром. Первые порции дистиллята собирают в приемник, содержащий 2-3 см³ 2 %-ного NaOH и проверяют на наличие солей синильной кислоты (образование берлинской лазури при добавлении раствора хлорида железа (II)). После этого отбирают ещё 10-15 см³ дистиллята и определяют в нем наличие этанола.

1.2. Реакция образования йодоформа.

При нагревании этилового спирта с раствором иода и щелочью, образуется йодоформ (СНI₃), имеющий специфический запах:

I₂ + 2NaOH ® NaOI + NaI + H₂O;

C₂H₅OH + NaOI ® CH₃– CHO + NaI + H₂O;

CH₃–CHO + 3 NaOI ® CI₃-CHO + 3 NaOH;

CI₃-CHO+ NaOH ® CHI₃+ HCOONa

Предел обнаружения: 0,04 мг этанола в 1 см³ раствора. Реакция не специфична на этиловый спирт. Ее дают ацетон, молочная кислота и др.

Реактивы и оборудование.

Дистиллят, содержащий этанол, 5 %-ный раствор гидроксида натрия, 1 %-ный раствор иода, приготовленный на 2 %-ном растворе иодида калия, пробирки, пипетки, баня водяная, плитка электрическая.

Ход работы.

В пробирку вносят 1 см³ дистиллята и 2 см³ 5-%-ного раствора гидроксида натрия. Затем по каплям прибавляют 1 %-ный раствор иода в 2 %-ном растворе иодида калия до слабо-желтого окрашивания. Затем смесь нагревают на водяной бане (50^ОС) до появления запаха иодоформа.

В протокол записывают ход работы, полученные результаты, формулируют выводы.

1.3. Реакция образования этилбензоата.

При взаимодействии этанола с хлористым бензоилом образуется этилбензоат, имеющий характерный запах:

Избыток хлористого бензоила маскирует запах этилбензоата, вследствие чего для разложения избытка бензоилхлорида прибавляют раствор щелочи:

Реактивы и оборудование.

Дистиллят, содержащий этанол, хлористый бензоил, 10 %-ный раствор гидроксида натрия, штатив с пробирками, пипетки с грушей.

Ход работы.

В пробирку вносят 1 см³ дистиллята, прибавляют 1-2 капли хлористого бензоила. При взбалтывании смеси прибавляют по каплям 10 %-ный раствор гидроксида натрия до исчезновения запаха хлористого бензоила.

Для лучшего ощущения запаха этилбензоата, несколько капель реакционной смеси наносят на кусочек фильтровальной бумаги.

В протоколе отмечают ход работы и результаты проведения реакции.

1.4. Реакция образования ацетальдегида.

Ацетальдегид, образующийся при окислении этилового спирта, можно обнаружить при помощи реакции с нитропруссидом натрия и морфолином.

Реактивы и оборудование.

Исследуемый раствор, содержащего ацетальдегид, 20 % водный раствор морфолина, 5 % водный раствор нитропруссида натрия, пробирки, пипетки, груши, фильтровальная бумага.

Ход работы.

2-3 капли раствора, содержащего ацетальдегид, наносят на фильтровальную бумагу и прибавляют каплю реактива (свежеприготовленная смесь равных объемов 20%-го водного раствора морфолина и 5%-го водного раствора нитропруссида натрия). При наличии ацетальдегида в растворе появляется синяя окраска.

Предел обнаружения: 1 мкг ацетальдегида в пробе.

В протоколе отмечают ход работы и результаты проведения реакций.