Метод включения меченого тимидина в ядра делящихся клеток.

Синтетический период митотического цикла (S-период) характеризуется редупликацией ДНК. В синтезе ДНК клеткой используются азотистые основания, в том числе тимин. Если животному ввести меченое радиоактивным изотопом производное тимина - ³H-тимидин, – то он будет включаться в ядра клеток, в которых происходит удвоение ДНК, т.е. находящихся в S- периоде митотического цикла. Для выявления таких клеток готовятся срезы исследуемых органов, а затем их покрывают слоем фотоэмульсии. В результате распада трития, входящего в состав меченого тимидина, над ядрами клеток, находящихся в S-периоде, будет происходить восстановление серебра, которое, после соответствующей обработки, будет иметь вид черных гранул. Клетки, находящиеся в других фазах жизненного цикла не будут иметь меченых ядер. Докраска препарата гистологическими красителями не изменяет информативность метода. На таких препаратах можно определить, какие из клеток органа или ткани способны к репродукции ДНК и количественно оценить интенсивность этих процессов.

На малом увеличении препарата найти многослойный плоский неороговевающий эпителий (1), расположенный на поверхности среза языка. С большим увеличением микроскопа рассмотреть глубокие слои эпителия, составляющие его ростковую зону (2). В ростковой зоне рассмотреть и зарисовать интерфазные ядра (3), ядра с фигурами митоза (4) и ядра, меченые ³H-тимидином (5). В ядрах, меченых ³H-тимидином, отметить гранулы восстановленного серебра (6), черного цвета. Обратите внимание, что метка имеется только в части клеток эпителия, в тех, которые находятся в S-периоде митотического цикла.

Зарисовать препарат и сделать обозначения.

6.2. Методические рекомендации к изучению электронограмм

Ядро и ядрышко.

На электронограмме видна часть ядра клетки.

I – ядерная оболочка, в которой хорошо различаются:

1. наружная ядерная мембрана

2. внутренняя ядерная мембрана

Между этими двумя ядерными мембранами находится перинуклеарное пространство. На внешней мембране заметны рибосомы (7), т.к. эта мембрана является продолжением мембран гранулярной эндоплазматической сети

II – ядрышко

3. нити хромосом

4. фибриллярный компонент ядрышка

5. гранулярный компонент ядрышка

6. субъединицы рибосом.

 

Апоптоз.

На электронограмме видна часть цитоплазмы и ядро гибнущей клетки. В ядре хорошо заметны электронномикроскопические признаки апоптоза:

1. Кольцевидная конденсация хроматина (скопление и уплотнение хроматина в виде кольца под ядерной оболочкой)

2. Расширение перинуклеарного пространства.

 

6.3. Схемы и таблицы по теме занятия:

ВОСПРОИЗВОДСТВО КЛЕТОК ГИБЕЛЬ КЛЕТОК

	1. Митоз (мейоз)

 

1 1. Митоз (мейоз)

 

ВИДЫ воспроизводства ядерного (генетического) материала без увеличения числа клеток:

1. Митоз без цитотомии и образование дву- или многоядерных клеток, обладающих суммарным полиплоидным набором хромосом и соответствующим содержанием ДНК.

2. Э ндоредупликация - кратное увеличение содержания ДНК (в S-периоде) без последующего образования «митотических» хромосом и митоза и формирование полиплоидного ядра.

3. Незавершенный митоз – остановка в про- или метафазе и образование полиплоидного ядра