Получение патологоанатомического материала

Вирусы из трупа животного выделяют из ткани или органов, в которых предположительно происходит наи­большее их накопление. Материал для исследования берут по возможности скорее (во избежание аутолиза). Иногда целесообразно провести диагностический убой больного живот­ного на стадии максимального проявления клинической картины болезни. При этом необходимо составить подробный протокол вскрытия и получить пробы.

Получение проб органов нервной системы

Такие пробы исследуют при подо­зрении на бешенство, энцефалиты, болезнь Ауески, энцефаломиелит птиц и другие инфекции, сопровождающиеся поражением центральной нервной систе­мы. У крупных животных (рогатый скот, лошади, овцы, свиньи, собаки, дикие звери) после удаления шерстного покрова, дезинфекции и удаления кожи и мышц делают распил черепной коробки, снимают твердую мозговую оболочку и обна­женный головной мозг целиком извлекают в стерильную посуду. Кролика для извлечения головного мозга фиксируют на станке или специальном лотке. Затем рассекают кожу от носа до шеи, если нужно взять и спинной мозг – до хвоста и отпрепаровывают. Череп смазывают йодом. Вскрывают черепную коробку костотомом. Крышку черепной коробки откидывают, твердую мозговую оболочку рассекают и удаляют, спинной мозг пересекают на уровне foramen occipitale magnum и весь головной мозг извлекают вместе с мозжечком.

Извлечение спинного мозга

Рассекают вдоль позвоночника мышцы спины, специальными костными щипцами или большими остроконечными ножницами пересекают с обеих сторон остистые отростки позвонков, снимают твердую моз­говую оболочку, обнаженный спинной мозг вынимают целиком или сегментами вместе с корешками и помещают в стерильную чашку Петри. При извлечении спинного мозга по методу Ошида позвоночник пересекают на уровне шейных и поясничных позвонков и стерильным зондом с ватным тампоном, введенным в спинномозговой канал с поясничного конца, выталки­вают спинной мозг в стерильную посуду. У морских свинок, крыс и мышей принцип взятия мозга такой же, как у кроликов. Для вскрытия черепной коробки морских свинок и крыс применяют остроконечные хирургические ножницы, для вскрытия черепа мышей – глаз­ные.

Спинной мозг мелких животных получают также методом выдавливания. Позвоночник вместе с ребрами и мышцами пересекают в шейной части, затем двумя пинцетами, начиная с хвостовой части, попеременно пережимают позво­ночник, постепенно передвигаясь к головному концу. Спинной мозг выдавливают из пересеченного шейного конца позвоночника.

Головной и спинной мозг не рекомендуется промывать растворами. При из­влечении их необходимо также соблюдать все предосторожности (работа в за­щитной спецодежде, в резиновых перчатках, защитной маске и очках, быть пре­дельно аккуратным).

Периферические нервы редко используют для выделения вируса. Метод по­лучения нерва обусловливается анатомическим его расположением. Для иссле­дования необходимо брать небольшой отрезок нерва.

Извлечение глаза

Ткани глаза используют для выделения вируса при болез­нях, сопровождающихся поражением глаза и конъюнктивы и накоплением или репродукцией вируса в них. Для извлечения глаза вокруг него рассекают кожу и удаляют ее. Ножницами рассекают конъюнктиву и глазные мышцы. Глазное яблоко выводят пинцетом из орбиты наружу, а затем пересекают глазной нерв. Извлеченное глазное яблоко фиксируют пинцетом за культю глазного нерва и струей стерильной питательной среды тщательно и обильно промывают. При необходимости исследования разных тканей глаза (например, роговицы) иссе­чение их производят в стерильных условиях.

Извлечение внутренних органов

Вскрытие грудной и брюшной полостей про­изводят по общим правилам. Для исследования берут вируссодержащие органы – легкие, печень, почки, лимфоузлы, селезенку, кишечник и др. При наличии макроскопических изменений органов из пораженной части их вырезают кусоч­ки, захватывая и непораженную ткань.

ПОЛУЧЕНИЕ ПРОБ ДЛЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО

ИССЛЕДОВАНИЯ

Пробу для гистологического исследования также необходимо проводить как можно скорее после гибели животного, до аутолиза и деструкции клеток. Если нет возможности доставить материал в лабораторию в течение нескольких часов, его помещают в консервирующий раствор. С. С Кальтер уточняет условия, обеспечивающие оптимальное сохранение проб.

1) соотношение жидкости и ткани 20:1;

2) толщина пробы не более 0,5 см (длина и ширина не играют особой роли);

3) использование для пересылки проб сосудов с широким горлом.

Ни в коем случае нельзя замораживать ткани или использовать буру при консервации проб, предназначенных для гистопатологического исследования!

Хороший фиксирующий раствор получают при смешивании 50 мл формалина (40 % раствора формальдегида в воде) с 450 мл воды и 3,8 г поваренной соли. При отсутствии измерительных приборов и весов такой раствор можно приготовить, взяв 3 столовые ложки формалина, 0,5 л воды и чайную ложечку поваренной соли.

В качестве материала для гистологических исследований берут кусочки (размером в несколько кубических сантиметров) тех органов, которые имеют видимые отклонения от нормы (по форме, размеру, цвету, консистенции, наличию необычных образований); могут быть поражены и содержать вирус на основании клинической картины болезни и предположительной избирательной локализации.