Расхождение хромосом бактерий - соответствие митозу эукариот

· у бактерий нет микротрубочек как у эукариот в митозе

· аналогов центромер у бактерий пока не обнаружено

Бинарное мономорфное деление клеток

· бинарное деление материнской клетки и расхождение 2-х дочерних клеток происходит послерасхождения дочерних хромосом

· сначала в середине клетки образуется инвагинация ЦПМ и клеточной стенки

· процесс активируется пенициллинсвязывающим белком Pbp3 (принимает участие в синтезе пептидогликана клеточных перегородок)

· в центре клетки образуется специфическая белковая структура – перисептальное кольцо

Мономорфное деление

· после разделения материнской бактериальной клетки образуются две одинаковые дочерние клетки.

· нет материнской и дочерней клеток – это мономорфное деление – т.е. деление, при котором образуются две равноценные клетки.

· пример бессмертия!!!

Дифференцировка клеток (диморфный тип деления)

у почкующихся бактерий:

· p. Hyphomicrobium

Материнская клетка дает начало почке – дочерней клетке

Хромосома проходит через гифу

· p. Caulobacter

· водные стебельковые бактерии

· бактерия – мать может дать начало 4 дочерним клеткам

· Деление происходит с образованием двух разных клеток:

1. свободноживущая клетка (дочь или швермерная клетка)

2. стебельковая клетка (прикрепляется к поверхности).

Покоящиеся формы бактерий

VBNC –некультивируемые формы (покоящиеся) МО – нанобактерии. Методом ПЦР определили 15 тыс. фантомных генотипов некультивируемых форм (нанобактерий)

Методы микроскопии м/о

Виды микроскопии:

• Светлопольная (в проходящем свете)

• Темнопольная (прижизненное изучение в нативных неокрашенных препаратах) Явление дифракции света при сильном боковом освещении взвешенных в жидкости мельчайших частиц (эффект Тиндаля)

• Фазово-контрастная (нативные прозрачные объекты)На светло-сером фоне наблюдается темно-серый рельефный объект с ярко выраженным контуром. Применяется для исследования неокрашенных прозрачных объектов, в частности, живых клеток.

• Люминесцентная (флюоресцентная) – люминесценция объекта под влиянием света (живые и неживые объекты в небольшом количестве)

• Электронная микроскопия (сканирующая, просвечивающая)

Основные методы окраски м/о, применяемые в медицинской микробиологии

Окраска микроорганизмов - комплекс методов изучения структуры и морфологии микроорганизмов при микроскопии препаратов, приготовленных из чистых культур или исследуемого материала.

Методы окраски нативных препаратов

• Для витальной окраски микроорганизмов (окраски живых микроорганизмов) красители применяют в больших разведениях (1:10 000— 1:100 000), чтобы избежать артефактов, появляющихся в результате токсического действия красителя на живые микроорганизмы. Чаще всего для витальной окраски используют: метиленовый синий, нейтральный красный и др.

Методы окраски фиксированных препаратов

• Простые: окраска метиленовым синим, фуксином Пфейфера, Генциан-виолетом

• Сложные: окраска по методу Грама, окраска по Цилю — Нельсену, окраска по Романовскому — Гимзе

Метод окраски по Граму

· Краситель - генциановый фиолетовый

· Образуется комплекс

· После обработки спиртом одни бактерии обесцвечиваются, другие нет

· После специальной докраски сафранином, часть бактерий – розовые

· Часть – темно-синие или фиолетовые

Исследование м/о в окрашенном и неокрашенном состоянии

Методы выявления капсулы. Метод окраски по Бурри-Гинсу

• Смешать каплю взвеси бактерий с каплей туши, сделать мазок, высушить и зафиксировать.

• На мазок нанести водный раствор фуксина (на 1-2 минуты) промыть водой, высушить и микроскопировать.

Бактерии окрашиваются в розовый цвет, а неокрашенные капсулы контрастно выделяются на черно- розовом фоне.

Метод окраски по Цилю-Ни(е)льсену

• Нанести на мазок карболовый раствор фуксина и подогреть до появления паров в течение 3 - 5 минут,

• промыть водой нанести 5% раствор H₂SO₄ на 1-2 минуты

• промыть водой докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 минут

• промыть водой, высушить и микроскопировать.

Раствор карболовой кислоты разрыхляет поверхностные структуры бактерий и тем самым повышает их тинкториальные свойства,

при этом вегетативные формы окрашиваются в красный цвет.

Метод окраски по Ожешко (и)

• На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор HCl и подогреть на пламени 2-3 минуты кислоту слить, препарат промыть водой, просушить, зафиксировать

• затем окрасить по Цилю-Нильсену

Раствор карболовой кислоты разрыхляет оболочку спор и тем самым повышает её тинкториальные свойства, при этом споры и вегетативные формы окрашиваются в красный цвет. При обработке препарата серной кислотой вегетативные формы обесцвечиваются и окрашиваются метиленовым синим в голубой цвет, а споры остаются красными.