Способы культивирования анаэробных бактерий

Для культивирования анаэробов применяют особые методы, сущность которых заключается в удалении воздуха или замены его специальной газовой смесью (или инертными газами) в герметизированных анаэростатах. В настоящее время чаще используетсяGasPak — система. Она химическим путем обеспечивает постоянство газовой смеси, приемлемой для роста большинства анаэробных микроорганизмов. В герметичном анаэростате, в результате реакции воды с таблетками боргидрида натрия и бикарбоната натрия образуется водород и диоксид углерода. Водород затем реагирует с кислородом газовой смеси на палладиевом катализаторе с образованием воды, уже вторично вступающей в реакцию гидролиза боргидрида. Метод был предложен Брюером и Олгаером в 1965 году. Разработчики представили одноразовый пакет, генерирующий водород, который был позднее усовершенствован ими до саше, генерирующих двуокись углерода и содержащих внутренний катализатор.

Рис. Анаэростаты GasPak — система

Другим способом выращивания анаэробов является использование эксикатора (на дно которого устанавливается зажженная свеча, либо наливается щелочной раствор пирагалола, поглощающий кислород).

Рис. Эксикатор

Как правило, посевы анаэробов производят на среде Китта-Тароцци, состоящей из МПБ, 0,5% глюкозы и кусочков печени или мясного фарша. Перед посевом среду прогревают в водяной бане в течение 10-15 мин для удаления воздуха и остужают. После посева среду заливают слоем вазелинового масла или парафином для изоляции от атмосферного воздуха. Так же часто применяют среду Вильсона-Блера - железосульфитный агар. Она состоит из МПА к которому добавляют глюкозу, сульфит натрия и хлорид железа. Среду развивают в пробирку высоким столбиком. Материал засевают уколом в столбик. Анаэробы образуют почернение по ходу укола, за счет образования сульфата железа.

Рис. Среда Китта-Тароцци до и после посева

Выделение чистых культур анаэробных бактерий

Методом Цейсслера

1 этап: исследуемый материал засевают на среду Китта-Тароцци. Пробирки заливают слоем вазелинового масла или парафина, подписывают и ставят в термостат при температуре 37 °С на сутки.

2 этап: на следующий день посевы на среде Китта-Тароцци просматривают и в случае наличия роста (помутнение среды) производят пересев в чашки Петри на сахарно-кровяной агар, для получения изолированных колоний. Чашки подписывают и помещают в анаэростат и термостатируют сутки при температуре 37 °С.

3 этап: просматривают посевы, изучают изолированные колонии. Для выделения и накопления чистой культуры производят пересев подозрительной колонии с чашки в пробирку со средой Китта-Тароцци. Пробирки термостатируют сутки при температуре 37 °С.

4 этап: изучают визуально характер роста чистой культуры на среде Китта-Тароцци. Затем, проводят проверку чистоты выделенной культуры, для чего ее микроскопируют. Чистая культура, выделенных анаэробных бактерий, морфологически и тинкториально однородна.