Закон Бугера - Ламберта - Бэра

Для многих веществ e_l хорошо известны и представляют собой табличные значения. Однако при использовании заранее известного значения e_l необходимо стараться точно воспроизвести условия, при которых оно было определено.

2). Если есть возможность приготовить стандартный раствор вещества с известной концентрацией (С_ст) (взяв точную навеску), то можно определить концентрацию вещества в исследуемом растворе (С_х), не зная e_l.

3). Графический метод, основанный на построении калибровочного графика в координатах D и C. Для построения калибровочного графика измеряют поглощение серии растворов данного вещества с известной концентрацией. Получаемый график обычно представляет собой прямую линию, тангенс угла наклона (tg_a) которой равен e_l × l (при l = 1 см tg_a = e_l). Измерив D исследуемого раствора, можно по калибровочному графику определить концентрацию вещества.

4). С помощью абсорбционного анализа можно одновременно определять концентрацию нескольких веществ в растворе при условии, что спектры их поглощения различаются по форме. Если компоненты смеси не взаимодействуют между собой, то измеряемая оптическая плотность будет представлять сумму оптических плотностей компонентов (поскольку D есть величина аддитивная).

Закон Бугера-Ламберта-Бера выполняется не всегда. Зависимость D от С может по разным причинам отклоняться от линейной. Количественное определение вещества по результатам измерения спектров поглощения можно проводить в том случае, если выполняются следующие требования:

1) измеряющий световой пучок является монохроматическим;

2) поглощающие молекулы распределены по всему объему образца равномерно;

3) поглощающие молекулы в пределах исследуемых концентраций не изменяют характера взаимодействия друг с другом и молекулами среды (e = соnst для данной длины волны);

4) выходящий световой поток ослабляется только за счет поглощения фотонов (светорассеяние, отражение, люминесценция и другие явления не влияют на регистрируемый световой поток);

5) интенсивность измеряющего светового пучка и время жизни поглощающих молекул в возбужденном состоянии таковы, что концентрация невозбужденных (способных поглощать свет) молекул не изменяется в ходе измерения;

6) измеряющий световой пучок не вызывает фотохимических превращений поглощающих молекул.

В случае отклонений от закона Бугера-Ламберта-Бера нужно строить градуировочные графики, связывающие наблюдаемые величины оптической плотности и известные концентрации, и путём графической интероляции находить концентрации исследуемых растворов.

При количественном спектрофотометрическом анализе главная задача исследователя – измерить концентрации, а значит, и оптические плотности растворов с большей возможной точностью. Ошибка измерения оптической плотности в сильной мере зависит от самой величины измеряемой оптической плотности