Нст-тест - спонтанный и стимулированный.

Принцип метода основан на способности нейтрофилов поглощать нитросиний тетразолий и восстанавливать его в гранулы нерастворимого диформазана в виде гранул синего цвета. Восстановление НСТ обеспечивается энергией и продуктами окислительно-восстановительных реакций “метаболического взрыва”, сопровождающего процесс фагоцитоза, при котором происходит образование перекиси водорода, супероксидного аниона, синглетного кислорода.

К гепаринизированной крови добавляют НСТ, инкубируют и затем в мазках определяют процент нейтрофилов, содержащих гранулы диформазана. Это спонтанный НСТ, в норме он от 3 до 15%. Для выявления резервов бактерицидной функции нейтрофилов применяют стимулированный НСТ-тест. При этом в лунку еще добавляют стимулятор фагоцитоза (латекс, пирогенал, зимозан и т.д.). В норме стимулированный НСТ-тест на 40-80% выше спонтанного.

Это тест может быть использован для дифференциальной диагностики бактериальных (высокие результаты) и вирусных (нормальные показатели) заболеваний, протекающих с лихорадкой, лейкоцитозом, высокой СОЭ. Однако, следует помнить, что высокие показатели НСТ-теста отмечаются при паразитарных инвазиях, вирусном гепатите, грибковых поражениях легких, туберкулезе. Кроме того, высокие показатели теста наблюдаются при многих небактериальных процесах: инфаркте миокарда, переломах, оперативных вмешательствах, лейкозах, у онкологических больных.

Раствор НСТ Кровь больного (+гепарин)

Инкубация,

фиксация, окраска мазка, микроскопия

Гранулы диформазана в ядрах нейтрофилов

ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРОВНЯ КОМПЛЕМЕНТА ПО 50% ГЕМОЛИЗУ

Комплемент (С) - сложный комплекс белков плазмы крови, участвующих в

воспалительной реакции и иммунных процессах:

-цитолиз клеток,

-усиливают фагоцитоз в качестве опсонинов,

-вызывают дегрануляцию гранулоцитов,

-выполняют регуляторную функцию, стимулируют активность различных популяций лимфоцитов и др.

Принцип определения основан на лизисе эритроцитов барана в присутствии гемолитических антител и комплемента. Для этого готовят гемсистему: эритроциты барана + гемолитическая сыворотка (гемолитическую сыворотку получают при иммунизации кролика эритроцитами барана, т.е. это АТ к эритроцитам барана - гемолизины). В отсутствии комплемента лизис эритроцитов не идет. К гемсистеме добавляют сыворотку больного в серийных разведениях. Чем больше концентрация комплемента в крови, тем интенсивнее идет гемолиз

Норма – 40-80 СН ₅₀.

Исследованиями последних лет выявлено, что гораздо большее диагностическое значение имеет определение отдельных компонентов комплемента (С3, С4, С5 и др.). Они определяются методами ИФА, турбидиметрическим (один из видов абсорбционного фотометрического анализа, основанный на измерении интенсивности света, проходящего через суспензию, образованную частицами определяемого вещества в жидкой фазе) и другими.

Комплемент принимает активное участие в защите организма от инфекции и является объективным показателем иммунологической реактивности организма. Любой воспалительный процесс при адекватном ответе сопровождается повышением уровня комплемента разной степени выраженности. Низкое содержание комплемента наблюдается при первичных и вторичных ИД. Дефицит комплемента отмечается при заболеваниях, протекающих с образованием иммунных комплексов (Аг-Ат), что приводит к избыточному потреблению компонентов комплемента (СКВ, острый гломерулонефрит, аутоиммунная гемолитическая анемия, болезни печени, сепсис, ожоги, повреждение тканей и т.д.), а также при наследственных дефицитах компонентов комплемента. Резкое снижение комплемента наблюдается при анафилактических реакциях.