Гемагглютинирующих сывороток

Цели работы: освоить методику определения групп крови, определить группу донорской крови.

Объект исследования – кровь человека.

На основании реакции агглютинации эритроцитов установлено, что кровь каждого человека принадлежит к одной из четырех групп. Кровь различных групп отличается наличием агглютининов и агглютиногенов. Агглютинины (склеивающие вещества) находятся в плазме. Агглютиногены – вещества, способные склеиваться, содержатся в эритроцитах.

Имеются два вида агглютиногенов – А и В и соответственно два вида агглютининов – a и b. Реакция агглютинации, т. е. склеивание эритроцитов, наступает лишь при смешении одноименных агглютининов и агглютиногенов, например a и А или b и В. Агглютинацию нельзя смешивать с процессом свертывания крови – выпадением фибрина в виде нерастворимых нитей.

Определение группы крови имеет практическое значение для переливания крови. При этом учитывают, прежде всего, свойства эритроцитов донора, так как плазма вводится в малом количестве и, разводясь в крови реципиента, теряет свои агглютинирующие качества. Однако при переливании значительного количества крови, учитывают и агглютинины донора.

Для работы необходимы: донорская кровь, стандартные сыворотки I, II и III групп двух разных серий, предметные стекла (чашка Петри), пипетки, стеклянные палочки.

Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины.

1. На чистые чашки Петри в обозначенные участки наносят по 1 капле сыворотки I, II и III групп двух серий, содержащих соответственно агглютинины: I – a и b, II – b и III – a.

2. В каждую каплю сыворотки, с помощью стеклянных палочек или разных углов предметных стекол, вносят небольшое количество донорской крови и тщательно размешивают кровь в капле сыворотки палочкой до тех пор, пока смесь не примет равномерного розового цвета.

3. Покачивают чашку Петри в течение 5 минут. При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков.

4. По мере наступления агглютинации, но не раньше, чем через 3 минуты в каждую смесь добавляют по одной капле физиологического раствора для предупреждения образования «монетных столбиков» из эритроцитов.

5. Определяют наличие агглютинации в каждой капле и устанавливают группу крови.

· Отсутствие агглютинации во всех трех каплях говорит об отсутствии агглютиногенов А и В в эритроцитах исследуемой крови, такая кровь принадлежит O(I) группе.

· Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащих соответственно агглютинины ab и a, то, следовательно, эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит А(II) группе.

· Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащих агглютинины ab и b, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и эта кровь принадлежит В(III) группе.

· Наличие агглютинации в сыворотках всех трех групп указывает на присутствие в эритроцитах исследуемой крови агглютиногенов А и В, следовательно, она принадлежит АВ(IV) группе. Однако в этом случае для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов необходимо провести дополнительное исследование со стандартной сывороткой группы АВ (IV). Отсутствие агглютинации в этой капле позволит считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к АВ(IV).

Источниками ошибок могут быть:

1. Оценка реакции отрицательной при фактическом наличии агглютинации. Это может быть обусловлено:

1.1. Поздней или слабовыраженной агглютинацией в связи с малой активностью стандартных сывороток;

1.2. Нарушением соотношения 1:10 при взятии большого количества крови;

1.3. Наличием температуры воздуха большей, чем 25^оС. В таких случаях исследования проводят при охлаждении стекла.

2. Оценка реакции положительной при практическом отсутствии агглютинации. Это может быть обусловлено:

2.1. Образованием «монетных столбиков»;

2.2. Наличием панагглютинации, которая развивается при t=15 ^о С; для

2.3. ее исключения следует повторить определение при более высокой температуре;

2.4. Подсыханием сывороток и образованием по краям капель «зернистости», принимаемой за агглютинацию. Это может быть в тех случаях, когда чтение результатов производится более чем через 5 минут.

Оформление протокола. Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученные результаты: обозначить номер группы крови, агглютинины стандартных сывороток и отсутствие или наличие агглютинации, например.

Вывод. Назвать и правильно записать группу крови. Обосновать полученный результат. Указать, в каких случаях исследуемая кровь может быть использована как донорская. Нарисовать схему совместимости групп крови системы АВО.