Определение группы крови системы АВО

С помощью цоликлонов

Цели работы: освоить методику определения групп крови, определить группу донорской крови.

Объект исследования – кровь человека.

Цоликлон – реагент, действующим началом которого являются моноклональные человеческие антитела. Моноклональные человеческие антитела продуцируются гетерогибридомой, полученной в результате слияния человеческой лимфобластоидной линии с миеломной клеточной линией мыши. Цоликлоны изготовляются из асцитической жидкости таких мышей.

Для определения групп крови системы АВО используются цоликлоны анти- А, анти- В и цоликлон анти- АВ, содержащие смесь анти- А и анти- В антител.

Анти- А и анти- В антитела цоликлона при смешивании с нативной кровью вызывают прямую агглютинацию эритроцитов, содержащих соответствующие А и В антигены. Заключение о присутствии антигена в исследуемых эритроцитах делают по наличию положительной реакции агглютинации.

Для работы необходимы: донорская кровь, цоликлоны (анти- А, анти-В, анти-АВ), предметные стекла (чашка Петри), пипетки, стеклянные палочки.

Проведение работы. Принцип определения группы крови человека системы АВО с помощью цоликлонов такой же, как и со стандартными гемагглютинирующими сыворотками.

1. Наносят на чашку Петри индивидуальными пипетками цоликлоны анти- А, анти- В и анти- АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.

2. Рядом с каплями антител помещают по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл).

3. Смешивают кровь с реагентом.

4. Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании чашки Петри в течение 3 минут.

5. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов.

· Отсутствие агглютинации во всех трех каплях говорит об отсутствии агглютиногенов А и В в эритроцитах исследуемой крови, такая кровь принадлежит O(I) группе.

· Если агглютинация произошла с цоликлонами анти- А и анти- АВ (I, II капли реагента), то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит А(II) группе.

· Если агглютинация произошла с цоликлонами анти- В и анти- АВ, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и эта кровь принадлежит В(III) группе.

Наличие агглютинации с цоликлонами анти- А, анти- В и анти - АВ свидетельствует о присутствии в эритроцитах исследуемой крови агглютиногенов А и В, следовательно, она принадлежит АВ(IV) группе.

 

Оформление протокола. Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученные результаты, обозначив содержание анти- А, анти- В и анти - АВ антител в чашках Петри и отсутствие или наличие агглютинации, например:

 

 

Вывод. Назвать и правильно записать группу крови. Обосновать полученный результат. Указать, в каких случаях исследуемая кровь может быть использована как донорская. Нарисовать схему совместимости групп крови системы АВО, и схему оценки результатов определения группы крови по цоликлонам.

 

 

Определение группы крови системы резус

Определение группы крови человека системы резус

С применением стандартной сыворотки

Цели работы: освоить методику определения групп донорской крови.

Объект исследования – кровь человека.

Для работы необходимы: донорская кровь, универсальная сыворотка, содержащая ант - Д - антирезус - антитела, 2 пробирки, пипетки, физиологический раствор, микроскоп.

Проведение работы

1. В обе пробирки внести по одной капле исследуемых эритроцитов (донорской крови). Затем добавить по 2 капли универсального реагента (сыворотки, содержащей антирезус – Д - агглютинины).

2. Содержимое пробирок перемешать, положив их сначала на один бок (в течение 1,5 минуты), затем – на другой на 1,5 минут. Такие манипуляции усиливают растекание смеси по стенкам пробирок и ускоряют агглютинацию. Как правило, агглютинация наступает в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса «антиген-антитело», а также ввиду возможности замедленной реакции при слабовыраженной агглютинабельности эритроцитов, наблюдение проводят 3 минуты. Через 3 мин, оценивают результаты.

3. Перед чтением результатов, для исключения неспецифической агрегации эритроцитов, добавляют 5-8 мл физиологического раствора хлористого натрия. Смесь перемешивают, не взбалтывая, путем одно-двухкратного перевертывания пробирок.

4. Оценку результатов проводят визуально. Появление хлопьев из эритроцитов (агглютинатов) на фоне прозрачной жидкости указывает на наличие резус-фактора в исследуемой крови (положительная реакция). При отрицательной реакции в пробирке видна равномерно окрашенная в розовый цвет, слегка опалесцирующая жидкость.

 

Оформление протокола. Записать принцип метода, ход работы. Зарисовать результаты реакции при микроскопическом исследовании, например,

 

Вывод. Назвать и правильно записать группу крови, например, кровь резус положительная (Rh+) или резус отрицательная (Rh-). Обосновать это заключение. Дать определение резус - иммунизации. Зарисовать схему резус - иммунизации крови.