Определение общего холестерина по методу Илька.

Принцип метода:

Холестерин в присутствии смеси уксусной и серной кислот, а также уксусного ангидрида дает зеленое окрашивание.

Ферментативный метод определения холестерина.

Принцип метода:

Принцип основан на действии фермента холестериноксидазы, в результате чего образуется холестенол и Н₂О₂.

                                   _ХЭ

Эфиры холестерина + Н₂О  холестерин + RCOOH

                        _ХО

Холестерин + О₂      ∆⁴ холестенон + Н₂О₂

                                                _ПОД

2 Н₂О₂ + 4-аминофеназон + фенол   4(п-бензохинономоноимино)- феназон + 2 Н₂О

(красная окраска)

Интенсивность окраски пропорциональна концентрации общего холестерина в сыворотке крови.

Материал для исследования:

1. Сыворотка крови;

2. Плазма (антикоагулянт – ЭДТА).

Реактивы:

1. Реагент № 1 буфер;

2. Реагент № 2 лиофилизат;

3. Реагент № 3 стандартный раствор холестерина.

Приготовление рабочего реагента:

Растворить содержимое одного флакона № 2 в 50 мл реагента № 1.

Ход определения:

Реактивы (мл)	Холостая проба	Проба	Стандартная проба
Рабочий реагент	2,00 мл	2,00 мл	2,00 мл
Бидистиллированная вода	0,02 мл	-	-
Стандарт	-	-	0,02 мл
Сыворотка крови	-	0,02 мл	-

Смешать инкубировать 10 мин. при температуре 37ºС. Считывать значение абсорбции пробы (D_о) и стандартной пробы (D_ст) против холостой пробы при длине волны 500 нм.

Расчет результатов:

	Dо
С =	--------------	* концентрацию стандарта
	Dст

 

 

Клинико-диагностическое значение:

Содержание ХС в значительной степени зависит от пола, возраста, состава пищи (меньше у вегетарианцев).

Повышение содержания ХС может быть физиологическим при эмоциональном возбуждении, беременности и патологическим:

1. первичным – семейная гиперхолестеринемия

2. вторичным при:

· атеросклерозе;

· болезнях печени: желтухи при застое желчи, гепатите, билиарном циррозе;

· болезнях почек: нефротическом синдроме, ХПН;

· болезнях поджелудочной железы: хроническом панкреатите, злокачественных опухолях;

· сахарном диабете;

· гипофункции щитовидной железы;

· ожирении и т.д.

Снижение концентрации ХС наблюдается при:

· болезнях печени: циррозе в поздней стадии заболевания, острой инфекции печени; инфекциях, связанных с повреждением печени (при синдроме печеночной недостаточности);

· гиперфункции щитовидной железы;

· голодании;

· сепсисе;

· лихорадочных состояниях;

· злоупотреблении алкоголем и т.д.

Исследование содержания ХС целесообразно у пациентов с ранними факторами риска атеросклероза, с заболеваниями сосудов и сердца, ксантомами, гипертонией, ожирением; людей, злоупотребляющих курением; а также при лечении бета-блокаторами, мочегонными и кортикостероидами.

Если в лаборатории исследуют эфирсвязанный ХС, то соотношение эХС/общий ХС = 0,6-0,7. Уменьшение количества эХС происходит параллельно степени нарушения функции печени и резкое снижение эХС является плохим прогностическим признаком, свидетельствующим о глубоком поражении печени.

ХОЛЕСТЕРИН - ЛПВП

ХС-ЛПВП – холестерин липопротеидов высокой плотности или α-холестерин. Его содержание коррелирует с уровнем неатерогенных липопротеидов крови. В организме осуществляет защитную, антиатерогенную функцию и является «тонким» критерием, отражающим состояние липидного обмена.

Особенностью функционирования ЛПВП является то, что они осуществляют транспорт ХС от клеток сосудистой стенки, периферических органов в печень, где ХС превращается в желчные кислоты и выводится из организма. Снижениеконцентрации ХС-ЛПВПниже 0,9 ммоль/л связывается с повышенным риском атеросклероза. Повышенный уровень ХС-ЛПВП рассматривается как антиатерогенный фактор.

Методы определения ХС-ЛПВП.

Метод с осаждением.

Принцип метода:

Липопротеины сыворотки человеческой крови низкой и очень плотности (ЛПНП, ЛПОНП) осаждаются под влиянием фосфовольфрамовой кислоты в присутствии ионов магния после центрифугирования. Фракции ЛПВП остаются в растворе. Холестерин, содержащийся в этих фракциях, определяют ферментативным методом.

ЛПВП-иммуно.

Это прямой иммунологический метод определения ХС-ЛПВП без центрифугирования. Антитела против человеческих липопротеинов используются для того, чтобы связать ЛПНП, ЛПОНП и хиломикроны в комплексы антиген-антитело, в то время как ХС-ЛПВП определяется ферментативным измерением холестерина.

Принцип определения:

                                           антитела к

ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП, ХМ                   ЛПВП + комплексы 

                                           человеческим β-ЛП          антиген-антитело

                                  _{ХЭ, ХО}

ХС-ЛПВП + Н₂О + О₂           холестенон + жирная кислота + Н₂О₂

Н₂О₂ + F-DAOS + 4-аминопирин     комплекс синего цвета + Н₂О

Норма: 0,9-1,9 ммоль/л (не менее 25% от общего холестерина)

Повышение концентрации:

· большая и регулярная физическая активность;

· некоторые лекарства, понижающие липиды;

· цирроз печени;

· алкоголизм.

Снижение концентрации наблюдается при:

· атеросклерозе (ИБС);

· инфаркте миокарда;

· сахарном диабете.

Снижение уровня ХС-ЛПВП сопровождает факторы риска ИБС, к числу которых относят малоподвижный образ жизни, курение, ожирение, гипертензию.

 

ФОСФОЛИПИДЫ

В норме около 1/3 общих липидов плазмы приходится на долю ФЛ. ФЛ плазмы включены в липопротеиды, за исключением лизолецитина, который транспортируется альбумином. Более 90% плазменных ФЛ печеночного происхождения, они поступают в циркулирующую кровь в составе ЛП. ФЛ входят в состав хиломикронов, которые формируются в энтероцитах из липидов, реабсорбированных в тонкой кишке. Молекулы ФЛ имеют гидрофильные и гидрофобные участки, тем самым оказывают стабилизирующий эффект по поддержанию ХС в растворенном состоянии. При уменьшении молекулярного соотношения ФЛ/ХС менее 3/2 рекомендуются липотропные диеты. Богатые ФЛ.

Нормальное содержание ФЛ – 1,5-3,6 г/л.

Повышение содержания наблюдается при:

· алкогольном и билиарном циррозе печени;

· сахарном диабете;

· вирусном гепатите (легкого течения)

· нефротическом синдроме;

· беременности.

Снижение содержания ФЛ в плазме крови отмечается при:

· гипертиреозе;

· тяжелом поражении паренхимы печени;

· атеросклерозе.