Работа 17. Изучение процесса денатурации белка

Задача работы: изучить пути денатурации белка и выработать навыки проведения реакций осаждения белка, в том числе клинических.

Оборудование, материалы: яичный белок, 5%-ный раствор ацетата свинца, насыщенный раствор сульфата меди, 20%-ный раствор сульфосалициловой кислоты, концентрированная азотная кислота, пипетки, пробирки, спиртовка.

Выполнение работы:

а) Осаждение белка ацетатом свинца. В пробирку наливают 10 капель яичного белка и прибавляют 4 капли 5%-ного раствора (CH₃COO)₂Pb. Образуется нерастворимый в воде осадок (при добавлении избытка ацетата свинца осадок легко растворяется).

б) Осаждение белка сульфатом меди. В пробирку наливают 1 мл раствора белка и прибавляют по каплям 2%-ный раствор сульфата меди. Выпадает осадок белка.

А минокислоты и белков способны связывать ионы тяжелых металлов, поэтому используется в медицинской практике как противоядия при отравлении солями ртути, меди, свинца и др.

в) Осаждение белка сульфосалициловой кислотой. В пробирку с 5 каплями раствора белка добавляют 2 капли 20%-ного раствора сульфосалициловой кислоты. Выпадает осадок белка. Объяснить наблюдаемое явление. Сульфосалициловая кислота обладает высокой чувствительностью по отношению к белку (чувствительность реакции 1:50000).

Используется для обнаружения малых количеств белка в различных биологических жидкостях (моче, экссудатах и пр.)

г) Осаждение белка концентрированной азотной кислотой (проба Геллера). В пробирку наливают 1 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно по стенке, слегка наклонив пробирку, приливают равный объем раствора белка так, чтобы жидкости не смешивались. На границе двух жидкостей образуется осадок в виде белого кольца. При встряхивании и добавлении избытка азотной кислоты осадок не растворяется, постепенно окрашиваясь в желтый цвет. Объяснить наблюдаемое явление. Реакция Геллера используется при клинических исследованиях мочи на белок.