Опыт 2. Обнаружение аминокислот, содержащих слабосвязанную серу (реакция Фоля).

 

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Газовая горелка.

4. Держатель для пробирок.

Реактивы. 1. Яичный белок, 1%-ный раствор.

2. Шерстяная нитка.

3. Желатин, 1%-ный раствор.

4. Гидроксид натрия, 30%-ный раствор.

5. Ацетат свинца, 5%-ный раствор.

 

1. В пробирку налейте 1 мл 1%-ного раствора яичного белка (или поместите кусочек шерстяной нити).

2. Добавьте 0,5 мл 30%-ной щелочи и 3-4 капли 5%-ного раствора ацетата свинца.

3. Нагрейте пробирку до кипения. Объясните причину постепенного потемнения раствора.

4. Повторите пункт 1-3 с 1%-ным раствором желатина.

 

Сделайте выводы.

 

 

Опыт 3. Обнаружение пептидной группы (биуретовая реакция).

 

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

Реактивы. 1. Глицин, 1%-ный раствор.

2. Яичный белок, 1%-ный раствор.

3. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

4. Сульфат меди, 2%-ный раствор.

 

1. Возьмите две пробирки.

2. В 1-ю пробирку поместите 0,5 мл 1%-ного раствора глицина, во 2-ю – 0,5 мл 1%-ного раствора яичного белка.

3. В каждую пробирку добавьте по 0,5 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия, а затем по 2-3 капли 2%-ного раствора сульфата меди (II).

 

В какой из пробирок появляется сине-фиолетовое окрашивание и почему? Напишите реакцию образования пептидной связи между двумя аминокислотами.

 

Опыт 4. Реакции осаждения белков.

 

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Стеклянная палочка.

4. Водяная баня, кипящая.

Реактивы. 1. Яичный белок, 1%-ный раствор.

2. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

3. Ацетон.

4. Сульфат аммония, насыщенный раствор.

5. Дистиллированная вода.

6. Уксусная кислота, 1%-ный раствор.

7. Уксусная кислота, 10%-ный раствор.

8. Трихлоруксусная кислота, 10%-ный раствор.

9. Ацетат свинца, 5%-ный раствор.

а) Обратимое осаждение белков сернокислым аммонием (высаливание).

 

1. В пробирку налейте 0,5 мл раствора яичного белка.

2. Добавьте равный объем насыщенного раствора сернокислого аммония.

 

Объясните причину выпадения осадка.

 

 

3. К раствору с осадком белков добавьте равный объем дистиллированной воды, перемешайте.

 

Почему наблюдается постепенное исчезновение осадка белков?

 

 

б) Осаждение белков при кипячении.

 

1. Возьмите четыре пробирки.

2. В каждую налейте по 0,5 мл раствора белка.

3. Первую пробирку оставьте без изменений, во 2-ю добавьте 1 каплю 1%-ной уксусной кислоты, в 3-ю – 5 капель 10%-ной уксусной кислоты, в 4-ю – 5 капель 10% гидроксида натрия.

4. Содержимое всех пробирок поставьте на 5 мин в кипящую водяную баню.

5. Сравните характер изменения растворов после нагревания.

 

Запишите в таблицу результаты осаждения белков при кипячении в различных средах (отметьте положительный результат осаждения плюсом, а отрицательный - минусом) и укажите в каждом случае причины появления или отсутствия осадка белка.

 

	Нейтральная среда	Слабокислая среда	Сильнокислая среда	Щелочная среда
Результат осаждения
Причина выпадения осадка

в) Осаждение белков солями тяжелых металлов, концентрированными минеральными кислотами, органическими растворителями.

 

1. Возьмите три пробирки.

2. В каждую налейте по 0,5 мл раствора белка.

3. В первую пробирку добавьте 0,5 мл 5%-ного раствора уксуснокислого свинца, во 2-ю – 0,5 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ), в 3-ю – 0,5 мл ацетона.

 

Результаты реакций осаждения белков запишите в таблицу:

Название веществ, осаждающих белки	Характер и цвет осадка	Чем обусловлена реакция и ее особенности

Опыт 5. Определение изоэлектрической точки белка (демонстрационный).

 

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Стеклянная палочка.

Реактивы. 1. Дигидрофосфат калия, 0,2 М раствор.

2. Лимонная кислота, 0,1 М раствор.

3. Желатин, порошок.

 

1. Возьмите 7 пробирок одинакового диаметра.

2. Насыпьте в каждую пробирку меркой по 1 мл измельченного в порошок желатина.

3. Прилейте в каждую пробирку по 10 мл буферного раствора с определенной величиной рН (см. таблицу).

 

рН буферного раствора
0,2 М р-р КН2РО4(мл)	–
0,1 М р-р лимонной к-ты (мл)							–

 

Через 15-20 мин измерьте высоту каждого столбика набухшего желатина. Постройте график зависимости степени набухания от величины рН и определите изоэлектрическую точку желатина (рI). Объясните, почему вы так решили?

 

 

 

__________________________________________________________________

 

 

Дата выполнения _______Балл _______Подпись преподавателя ____________