Опыт 2. Определение содержания b- и пре-b-липопротеинов в сыворотке крови.

 

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Стеклянная палочка.

4. ФЭК.

5. Кюветы, 0,5 см.

Реактивы. 1. Сыворотка крови.

2. Хлорид кальция, 0,025М раствор.

3. Гепарин, 1%-ный раствор.

4. Дистиллированная вода.

 

1. В пробирку налейте 2 мл 0,025 М хлористого кальция и добавьте 0,2 мл сыворотки крови.

2. Измерьте оптическую плотность пробы (D₁) на ФЭК-е при длине волны 630-690 нм (красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 0,5 см против дистиллированной воды. Запишите значение оптической плотности D₁.

3. Затем в кювету добавьте 0,04 мл 1%-го раствора гепарина (1000ЕД в 1 мл), тщательно перемешайте стеклянной палочкой и точно через 4 мин вновь измерьте оптическую плотность D₂.

 

Разница значений (D₂ – D₁) соответствует оптической плотности, обусловленной осадком b-липопротеинов.

 

Рассчитайте содержание b- и пре-b-липопротеинов в мг% по формуле:

 

Содержание липопротеинов = (D₂ – D₁) ´ 1165 мг%,

 

где 1165 - коэффициент, найденный расчетным способом.

 

Укажите место биосинтеза b-липопротеинов. Какую функцию они выполняют в организме человека и животных? Сравните полученное Вами значение с нормальными величинами. В каких случаях наблюдаются отклонения от нормальных величин?

Опыт 3. Экспресс метод определения кетоновых тел в моче, молоке, сыворотке крови (проба Лестраде).

 

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Стеклянная палочка.

4. Фильтровальная бумага.

Реактивы. 1. Порошок реактивов.

2. Моча.

3. Сыворотка крови.

4. Молоко.

 

1. На фильтровальную бумагу на кончике скальпеля поместите небольшое количество (0,1-0,2 г) порошка реактивов.

2. Несколько капель сыворотки крови или мочи перенесите на порошок реактивов.

3. Результаты теста оцените через 5 минут.

 

Минимальный уровень кетоновых тел в крови, дающий положительную реакцию, равен 10мг/100 мл (10 мг%). Скорость развития окраски и ее интенсивность пропорциональны концентрации кетоновых тел в исследуемой пробе: если фиолетовое окрашивание возникает немедленно - содержание 50-80 мг% и более; если оно появляется через 1 минуту - в пробе содержится 30-50 мг%; развитие слабой окраски через 3 минуты свидетельствует о присутствии 10-30 мг% кетоновых тел.

Следует помнить, что тест более чем в 3 раза чувствительнее при определении ацетоуксусной кислоты, чем ацетона. Из всех кетоновых тел в сыворотке крови человека ацетоуксусная кислота является преобладающей, однако в крови здоровых коров 70-90% кетоновых тел составляет b-оксимасляная кислота, в молоке на ее долю приходится 87-92%.

 

Сделайте вывод по результатам Вашего исследования. Объясните, чем опасно избыточное образование кетоновых тел в организме человека и животных?

 

 

Опыт 4. Определения видовой принадлежности жира по температуре плавления жира.

Приборы. 1. Фарфоровая чашка.

2. Капилляры стеклянные.

3. Холодильник.

4. Термометр.

5. Химический стаканчик, 150-250 мл.

6. Штатив.

7. Стеклянная палочка.

Реактивы. 1. Жир животный.

1. Исследуемый жир поместите в фарфоровую чашку, вытопите его на горелке и наберите в прозрачные стеклянные капилляры диаметром 1,5 мм. Высота столбика жира должна быть 5-7 мм.

2. Капилляры с жиром поместите в холодильник на 1-2 часа.

3. После охлаждения капилляр с жиром при помощи резинки закрепите на термометре таким образом, чтобы столбик жира был на одном уровне с головкой термометра.

4. Термометр вместе с капилляром закрепляют на штативе и опустите в прозрачный химический стакан, наполненный водой и стоящий на электрической плитке, таким образом, чтобы верхняя часть капилляра была выше поверхности воды.

5. Начинайте нагревать воду, помешивая ее стеклянной палочкой. Нагревание продолжайте до тех пор, пока столбик жира не станет прозрачным и под давлением воды станет подниматься вверх по капилляру. В этом момент снимают показатель термометра.

6. Измерение повторите пять раз и найдите среднее арифметическое.

Полученный результат считают температурой плавления исследуемого жира. Данные о температуре плавления жира приведены в таблице.

Вид животного	Температура плавления жира животных разных видов
T°Сплавления наружного жира	T°С плавления внутреннего жира
Крупный рогатый скот		49,5
Лошадь	28,5	31,5
Мелкий рогатый скот	49,5
Собака
Свинья	37,5	45,5
Олень	48,5
Кролик
Кошка
Нутрия
Гусь
Курица

 

 

На основании полученных результатов сделайте вывод.

 

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________