Применение РА в серодиагностике

Ингредиенты:

1. Антитела – находятся в сыворотке обследуемого человека. Сыворотку разводят физиологическим раствором от 1:40 до 1:1600.

2. Антигены – диагностикумы. Добавляют в каждое разведение поровну.

3. Электролит – 0.9 % раствор NaCl.

 

I. На стекле

 

 

«+» феномен агглютинации – образование хлопьев

«-» феномен агглютинации – равномерная муть

II. Развернутая пробирочная реакция агглютинации

 

Ингредиенты:

Исследуемый материал_________________________содержит__________________

Диагностический препарат______________________содержит__________________

 

РА с целью серодиагностики цепного тифа

 

Диагностикум	Разведения сыворотки	Контроль
1/20	1/40	1/80	1/160	1/320	1/640	сыворотки	диагностикума
На 5 день
На 14 день

Диагностический титр = 1/200

 

Ответ: Титр АТ на 5 день болезни = ___________________________________________

титр АТ на 14 день болезни = ________________________________________________

 

Вывод______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Реакция непрямой (нагрузочной) гемагглютинации (РНГА)

Принцип метода: Реакции, в которой происходит склеивание эритроцитов с нагруженными с ними антигенами (эритроцитарный диагностикум) или антителами «укрупнителями» для придания молекулярным антигенам корпус-кулярности.

РНГА используется очень широко, благодаря высокой чувствительности особенно на ранних стадиях заболевания.

 

«+» феномен РНГА – «зонтик»

«-» феномен РНГА – «пуговка»

 

 

Применение РНГА в серодиагностике

Принцип реакции: Сыворотку больного разводят в нескольких рядах. К каждому разведению прибавляют равное количество соответствующего эритроцитарного диагностикума.

 

РНГА с целью серодиагностики цепного тифа

Ингредиенты:

Исследуемый материал_______________________, содержит______________________

Диагностический препарат____________________, содержит______________________

 

 

Сыворотка больного

5 день болезни

14 день болезни

 

Ответ: Титр АТ на 5 день болезни = ___________________________________________

______________на 14 день болезни = __________________________________________

Вывод:____________________________________________________________________

__________________________________________________________________________

Реакция связывания комплемента (РСК)

 

Принцип метода: Спецефические комплекс АГ + АТ всегда атсорбирует на себе комплемент.

В РСК участвуют две системы:

1. Основная. Состоит из АГ и АТ (1комплемент известен, другой – нет). Если АГ соответствует АТ, то образуется комплекс, который свяжет комплемент. Этот комплекс невиден. Об образовании его узнают при помощи 2й системы.

2. Индикаторная (гемолитическая) система. Состоит из эритроцитов барана (АГ) и соответствующей им гемолитической сыворотки (АТ), т.е. это готовый иммунный комплекс.

«+» феномен РСК – отсутствие гемолиза (содержимое лунки мутное или на ее дне осадок эритроцитов)

«-» феномен РСК – гемолиз («лаковая кровь», жидкость прозрачна)

 

Иммуно-ферментный анализ (ИФА)

Принцип метода: Антитела к искомому антигену фиксируют на носителе (в лунках полистироловой панели). Вносят исследуемый материал, добавляют антитела меченые ферментом, и хромогенный субстрат. Все этапы разделяются интенсивной промывкой лунок при соответствии АГ и АТ жидкость в лунке по завершении реакции меняет цвет, причем интенсивность окрашивания пропорционально количеству искомого компонента.

«+» феномен ИФА – появление окрашивания

«-» феномен ИФА – отсутствие окрашивание