Использование результатов анализов для того, чтобы проследить «распространение болезни».

 

Число положительных результатов в классе будет зависеть от того, сколько образцов, содержащих антиген, было с самого начала. Вы можете отследить как «болезнь» распространяется по классу.

Вы можете попросить ваших учеников, чтобы они сами придумали, как именно отследить распространение болезни, или воспользоваться таблицей для результатов, приведенной в руководстве для учеников. Нарисуйте таблицу на доске (или воспользуйтесь проектором). Попросите каждого ученика подойти и написать (+) или (-) в столбце с результатами ИФА. В зависимости от этого они также пишут (+) или (-) напротив имен тех, с которыми они менялись. Например, если результат Саши положительный, и он менялся с Ваней, Катей и Ильдаром, он пишет (+) напротив своего имени и напротив имен Вани, Кати и Ильдара. Ученики, напротив имен которых будет больше всего плюсов, выявляются как ранние источники инфекции.

 

Вопрос: почему невозможно отследить инфекцию до одного-единственного ученика?

Ответ: когда ученик, исходно бывший источником инфекции, обменивается своим образцом с товарищем, напротив имени последнего будет стоять столько же плюсов. Это проблема, с которой эпидемиологи сталкиваются при решении реальных задач. Именно поэтому им зачастую приходится изучать истории болезней, места нахождения пациентов и их поведение. Вы также можете попросить учеников провести более подробный анализ, например вспомнить,в каком порядке происходил обмен образцами.

 

У эпидемиологов редко бывают данные анализов пациентов до вспышки болезни и редко когда им удается проследить источник заболевания до конкретного человека. У вас есть преимущество: вы знаете, кто получил «инфицированные» образцы. Вы можете определить, насколько близки к истине оказались догадки ваших учеников.

 

Подготовка преподавателя к лабораторной работе

 

Этот раздел предназначен для того, чтобы вы хорошо подготовились к предстоящей работе. Мы рекомендуем вам прочитать все руководство (Протокол I) перед тем, как приступать к работе. Используйте информацию из приложения В, если вы хотите использовать сценарий урока, связанный с конкретной болезнью.

Самым важным для успеха работы будет, чтобы ученики капали в лунки нужные растворы в нужном порядке, поэтому подписывайте пробирки четко и понятно. Используйте пробирки разных цветов, как указано ниже.

 

Задачи

 

Шаг 1 Приготовить буферные растворы

Шаг 2 Приготовить 50x стоковые растворы антитела, первичных и вторичных антител

Шаг 3 Развести стоковые растворы

Шаг 4 Приготовить порции (аликвоты) растворов для рабочих мест учеников

Шаг 5 Подготовить рабочие места

 

Необходимое время

1-3 часа

 

Мы рекомендуем разводить сухой антиген и первичные антитела не раньше чем за 3 дня до начала работы, а вторичные антитела – в течение 24 часов перед началом работы. Также мы рекомендуем использовать стерильную дистиллированную воду для приготовления однократного PBS, чтобы избежать заражения реагентов. Растворы антител и антигена должны храниться на льду или на +4°С в холодильнике, если они приготовлены более чем за 4 часа до начала работы.

 

Внимание: если вы планируете использовать набор для проведения нескольких занятий в течение 1-2 недель, мы настоятельно рекомендуем использовать стерильную воду для приготовления PBS! Воду можно стерилизовать в 5-минутным кипячением в микроволновой печи в неплотно закрытой бутылке; когда вы вынете бутылку из микроволновки, дайте ей остыть, потом закрутите крышку. Разводите  концентрированные растворы антигена и антител строго в том количестве, какое вам потребуется для урока. Оставшиеся стоковые растворы храните в холодильнике на 4°С, их можно использовать в течение двух недель. Не замораживайте растворы.

 

Измерение объема

 

Этот набор содержит одноразовые пластиковые пипетки для измерения объемов от 250 мкл до мл. Соответствующие отметки на пипетке показаны на рисунке. Чтобы добавить несколько миллилитров, просто добавьте нужное число раз по миллилитру. Вам также понадобятся микропипетки для добавления объема в 50 мкл. Для каждого шага подготовки к работе, используйте новую одноразовую пипетку или чистый носик для микропипетки.

Для измерения объема пенящихся жидкостей, содержащих детергент, отмеривайте объем по границе жидкости и пузырей.

 

Протокол I: пошаговое руководство для подготовки

 

Рассчитано на подготовку 12 рабочих мест, каждое для 4 учеников

 

Реагенты в составе набора	Необходимое количество
Антиген, куриный гамма-глобулин, сухой	1 флакон
Первичные антитела, кроличьи анти-куриные поликлональные антитела, сухие	1 флакон
Вторичные антитела, козьи анти-кроличьи антитела, конъюгированные с пероксидазой, сухие	1 флакон
Субстрат пероксидазы (ТМБ)	1 банка
10х фосфатно-солевой буфер (PBS)	1 банка
10% Твин 20	1 банка
Дополнительные реагенты
Дистиллированная вода (рекомендуется стерильная вода)	1 л