Как иммунная система защищает нас от болезней?

 

Как доктора используют наш иммунный ответ, чтобы защитить нас от болезней?

Каковы возможные пути передачи и распространения заболеваний?

 

 

4.Приведите пример болезней, атакующих человеческую иммунную систему

 

 

Какого рода бывают нарушения работы иммунной системы?

6.Почему при трансплантации органов необходимы иммунносупрессанты?

 

 

Почему важна быстрая диагностика заболеваний?

 

 

Как расшифровывается ИФА?

 

 

Зачем в этом тесте используются ферменты?

 

 

Почему в тесте наряду с опытными образцами нужен положительный и отрицательный контроль?

 

Лабораторный протокол

 

 

Список для проверки рабочих мест. Одно рабочее место рассчитано на 4 учеников

 

Предмет	Содержимое	Количество	(ü)
Желтые пробирки	Образцы для анализа (0.75 мл)	4 шт (по 1 на ученика)	q
Фиолетовая пробирка (+)	Положительный контроль (0.5 мл)	1 шт	q
Синяя пробирка (-)	Отрицательный контроль (0.5 мл)	1 шт	q
Зеленая пробирка (П.А.)	Первичные антитела (1.5 мл)	1 шт	q
Оранжевая пробирка (В.А.)	Вторичные антитела (1.5.мл)	1 шт	q
Коричневая пробирка (Субстрат)	Субстрат пероксидазы (ТМБ) 1.5 мл	1 шт	q
12-луночные стрипы		2 шт	q
Микропипетка		1 шт	q
Желтые носики для микропипетки		10-20 шт	q
Одноразовые пластиковые пипетки		5 шт	q
70-80 мл промывочного буфера в стакане	Фосфатно-солевой буфер (PBS), содержащий 0.05% Твин 20	1 шт	q
Большая пачка бумажных полотенец		2	q
Черный фломастер (маркер)		1 шт	q

 

Обмен образцами

1. Подпишите желтую микроцентрифужную пробирку и одноразовую пластиковую пипетку вашими инициалами (именем).

 

1. С помощью пипетки перенесите весь ваш образец в пробирку другого ученика. Аккуратно перемешайте образцы, пипетируя раствор в пробирке, потом отберите половину обратно в свою пробирку. Запишите имя вашего первого партнера.

1. По просьбе учителя, повторите обмен еще два раза. Запишите имена ваших партнеров. После этого шага выкиньте пипетку.

 

Здесь работа может быть остановлена. В этом случае надо поместить образцы на +4°С

Выполнение ИФА

 

1. Возьмите ваш 12-луночный стрип. Подпишите первые три лунки «+» (это будет положительный контроль), следующие три лунки «-» (отрицательный контроль). Следующие шесть лунок предназначаются для вашего опыта и опыта вашего напарника по работе (по три), подпишите их вашими инициалами. Например, Митя Гиляров и Аня Лопатина подписали бы свои лунки так:

 

1. Для связывания антигена:

 

а. Чистым носиком перенесите по 50 мкл положительного контроля из фиолетовой пробирки в первые три («+») лунки.

 

б. Чистым носиком перенесите по 50 мкл отрицательного контроля из синей пробирки в следующие три («-») лунки.

 

в. Вместе с вашим напарником перенесите по 50 мкл ваших образцов в подписанные вашими именами лунки. Обязательно используйте чистый носик для каждого образца!

 

1. Подождите 5 минут, для того чтобы все белки в составе образца связались с плашкой.

 

1. Промойте лунки:

 

А. Переверните стрип, положите его на пачку бумажных полотенец и легонько постучите по дну. Убедитесь, что брызги не попали обратно в лунки.

 

 

Б. Выкиньте верхнее полотенце.

 

В. Чистой пипеткой заполните каждую лунку буфером для промывки из стакана, стараясь не переливать его через стенки. Для всех стадий промывки можно использовать одну и ту же одноразовую пипетку.

 

Г. Опять положите стрип на пачку полотенец и постучите по дну.

 

 

 

Д. Выкиньте 2-3 верхних полотенца (которые промокли).

 

 

1. Повторите всю процедуру промывки (шаг 7) еще раз.

 

 

1.   Чистым носиком добавьте по 50 мкл раствора первичных антител («П.А».)из зеленой микропробирки во все 12 лунок.

 

 

 

1. Подождите 5 минут, чтобы антитела могли связаться с антигеном

 

1. Промойте лунки, повторив процедуру промывки ДВА раза.

 

 

1. Чистым носиком добавьте по 50 мкл раствора вторичных антител («В.А.») из оранжевой пробирки во все 12 лунок.

 

1. Подождите 5 минут, чтобы вторичные антитела могли связаться с первичными.

 

 

1. Промойте лунки, повторив процедуру промывки ТРИ раза.

 

1. Чистым носиком добавьте по 50 мкл субстрата пероксидазы («Субстрат») из коричневой пробирки во все 12 лунок.

 

 

 

1. Подождите 5 минут. Наблюдайте за тем, что получилось, и запишите ваши результаты.

 

Результаты

 

Обозначьте лунки на картинке так же, как лунки в вашем эксперименте и напишите «+» на тех лунках, которые стали синими и «-» - на тех, которые остались бесцветными.

 

Заражены ли вы болезнью? (ДА/НЕТ) обведите

 

Вы можете проследить за распространением болезни, если каждый напишет результат своего теста напротив имен тех, с кем он обменивался (своих партнеров).