Как ИФА используется в реальной жизни?

Благодаря своей быстроте, ИФА нашел широкое применение в сельском хозяйстве и медицине. ИФА используют в тестах на беременность и на наркотики, для диагностирования заболеваний у человека, животных и растений, для тестирования качества воздуха в помещениях и правильности маркировки пищевых продуктов. При появлении новых опасных заболеваний, таких как атипичная пневмония, одной из первых задач является создание быстрых и простых тестов на то, заражен ли пациент вирусом.

 

Некоторые тесты могут дать положительный или отрицательный результат в течение нескольких минут. Например, домашние тесты на беременность основаны на принципах, очень похожих на ИФА. Они детектируют человеческий хорионный гонадотропин (ХГЧ) – гормон, который появляется в крови и моче беременной женщины через несколько дней после оплодотворения. Ближе к нижнему краю на тестовую полоску нанесены антитела к ХГЧ, связанные с розовым красителем (шаг 1). После того, как нижний край полоски погружается в мочу, жидкость начинает подниматься наверх под действием капиллярной силы, вместе с ней перемещаются и антитела. Если в моче содержится ХГЧ, он связывается с антителами (шаг 2). Когда комплексы достигают первой тестовой зоны, они связываются с антителами к ХГЧ, фиксированными на полоске, и концентрируются в виде розовой полосы (шаг 3). На полоске всегда есть внутренний контроль в виде фиксированных вторичных антител (узнающих антитела к ХГЧ как связанные, так и не связанные с антигеном) (шаг 4). Таким образом, любой работающий тест дает одну розовую полосу, но только при положительном результате теста можно увидеть две полосы.

 

Зачем нужны контроли?

 

Положительный и отрицательный контроли являются необходимой частью любого теста. Они позволяют нам убедиться в том, что тест работает корректно. Положительный контроль это образец, в котором заведомо содержится исследуемый антиген, а отрицательный контроль – заведомо чистый образец.

 

Ваша задача сегодня

 

Вам будут предоставлены средства и экспериментальный протокол для выполнения ИФА. Вам будет дан образец, которым вам надо будет обменяться со своими товарищами, имитируя контакт людей друг с другом и перенос инфекций. Один или два образца в классе будут исходно «инфицированными», т.е. будут содержать антиген. Вам также будут предоставлены контрольные образцы (положительный и отрицательный контроли). Вместе с другими учениками вы должны будете протестировать ваши образцы на содержание «болезнетворного агента» и проследить как «болезнь» распространяется по классу.

 

Давайте приступим к работе.

 

 

Ваша задача:

 

Шаг 1: обменяться образцами с другими учениками

 

Шаг 2: Добавить ваши образцы и контроли в лунки плашки.

Ваши образцы содержат много разных белков и могут содержать или не содержать антиген. Подождите 5 минут, чтобы дать возможность всем белкам за счет гидрофобных взаимодействий связаться со пластиком плашки.

 

 

Шаг 3: добавить в лунку антитела против антигена – первичные антитела. Если в вашем образце присутствовал антиген, первичные антитела найдут его молекулы среди всех других молекул, и прочно свяжутся с ними.

 

 

Шаг 4: добавить соединенные с ферментом – пероксидазой вторичные антитела (антитела на антитела). Если в образце есть первичные антитела, связанные с антигеном, вторичные антитела свяжутся с ними.

 

 

Шаг 5: добавить субстрат пероксидазы, подождать 5 минут, и оценить результаты анализа. Если раствор в лунке станет синим, анализ положительный (ваш образец «заражен»). Если раствор останется бесцветным, анализ отрицательный.

Вопросы до лабораторной работы