РНГА с целью серодиагностики

Исследуемый материал: сыворотка крови больного брюшным тифом;

Диагностический препарат: Эритроцитарный брюшнотифозный Vi диагностикум (эритроциты барана сенсибилизированные антигеном вирулентности возбудителя брюшного тифа).

Разведения сыворотки	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320	КД
Учет результатов (зарисовать)

Диагностический титр 1:80: Титр Ат в реакции 1:80; Вывод: обследуемый болен брюшным тифом.

б) Реакция преципитации _ (лат.осаждение) взаимодействие растворимого (молекулярного) антигена с антителом с формированием и осаждением иммунного комплекса в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах, избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.

Преципитирующие сыворотки (что содержит, как получают) содержат антитела (преципитины) к мелкодисперсным антигенам и используются для идентификации антигенов при диагностике инфекционных заболеваний (сибирской язвы, чумы), серотипирования стрептококков и менингококков; их получают иммунизацией кроликов мелкодисперсными молекулярными антигенами (очищенными белковыми антигенными фракциями, токсинами и т. д.).

Титр преципитирующей сыворотки максимальное разведение антигена, которое преципитируется цельной сывороткой. Выпускают диагностические преципитирующие сыворотки с титром не меньше 1: 100 000.Это связано с тем, что антиген, определяемый в реакции преципитации, имеет молекулярную дисперсность и из-за этого громадную суммарную поверхность, для покрытия которой нужно очень много антител.

Разновидности реакций преципитации:

1. реакция кольцепреципитации;

1. реакция микропреципитации (к капле плазмы или сыворотки добавляют Аг, образуется помутнение, используется при диагностике сифилиса);

1. простая радиальная иммунодиффузия по Манчини;

1. двойная встречная иммунодиффузия по Оухтерлони;

1. иммуноэлектрофорез (преципитация + электрофорез).

1. ►4. Постановка и учет реакции кольцепреципитации по Асколи ( обнаружение антигенов возбудителя сибирской язвы- Bаcillus anthracis).

Принцип метода взаимодействие растворимых молекулярных антигенов Bаcillus anthracis (термоэкстракты, полученные кипячением кожи, шерсти, мяса животных, почвы, выделенной культуры) с антителами против возбудителя (сыворотка крови вакцинированного крупного рогатого) с образованием видимого в пробирке преципитата кольцеобразной формы.

Схема постановки и учета реакции Асколи — реакции преципитации (термопреципитации) для обнаружения возбудителя сибирской язвы или его антигенов в различных субстратах (кожа, шерсть, войлок, щетина, сукно, мясо, земля, испражнения животных и т. д.). Из исследуемого материала готовят вытяжку в изотоническом растворе хлорида натрия путем кипячения в течение 5—45 мин. или экстрагируют антиген 0,5% карболовой или уксусной кислотой в изотоническом растворе хлорида натрия. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр или центрифугируют при 1000—3000 об/мин. В узкую пробирку для преципитации наливают иммунную преципитирующую противосибиреязвенную сыворотку и осторожно наслаивают на нее испытуемый экстракт. В течение 10 минут на границе между сывороткой и экстрактом в положительных случаях появляется кольцо помутнения (кольцепреципитация). а) Схема взаимодействия; б) Положительная реакция Асколи.

►5. Реакция двойной встречной иммунодиффузии по Оухтерлони (реакция преципитации в геле)

Принцип метода: В агаровом геле формируют лунки, в которые вносят антигены и сыворотку. Антитела и антигены диффундируют навстречу друг другу в агар и образуют линии преципитации. Возможны три варианта расположений линий преципитации:

	Обе линии преципитации полностью сливаются, что говорит об идентичности обоих антигенов.
	Линии преципитации пересекаются, что говорит о неидентичности антигенов.
	Если антигены частично идентичны, образуется одна, оторванная от общей, линия преципитации («шпора»), что говорит о наличие как общих детерминант между антигенами, так и дополнительных детерминант у одного из антигенов.

►6. Выявление токсигенности возбудителя дифтерии в реакции преципитации в геле (тест Илека)

Исследуемый материал – выделенные чистые культуры возбудителя дифтерии (посев «бляшками»)

Диагностический препарат – антитоксическая сыворотка, содержащая антитела - антитоксины (в бумажной полоске)

Принцип реакции: антиген и антитело диффундируют в гель, при встрече образуют комплексы, которые осаждаются в виде линий преципитации. Если линия преципитации появляется, следовательно, культура микроорганизмов токсигенная, т. е. продуцирует экзотоксин. Если отсутствует – культура нетоксигенная.

в) Реакции нейтрализации (РН) токсинов антитоксической сывороткой

Антитоксические сыворотки (что содержат, как получают) содержат антитела против токсинов бактерий, их получают иммунизацией лошадей анатоксинами (обезвреженными формалином и нагреванием токсинами,напримерстолбнячным,дифтерийным или ботулотоксином).

Варианты учета РН: а) in vivo - на белых мышах;  б) in vi tro – в РНГА (планшеты или пробирки).

ЗАНЯТИЕ № 13 ТЕМА: СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ С УЧАСТИЕМ КОМПЛЕМЕНТА. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕЧЕНЫХ КОМПОНЕНТОВ. РАДИОАКТИВНЫЕ, ФЛЮОРЕСЦЕНТНЫЕ, ФЕРМЕНТНЫЕ МЕТКИ.